多種方法誘導(dǎo)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的實驗研究.pdf

1、目的： 通過體外實驗，觀察化學(xué)誘導(dǎo)劑和模擬的生物微環(huán)境誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化。 方法： 取6～8w齡SD大鼠股骨骨髓，培養(yǎng)至第二代，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞純度97％以上，然后分成五組：A組，單純DMEM細(xì)胞培養(yǎng)組(對照組)；B組，5-氮雜胞苷誘導(dǎo)組；C組，心肌細(xì)胞裂解液組；D組，心肌細(xì)胞裂解液組+5-氮雜胞苷組；E組，細(xì)胞間接接觸組。根據(jù)各自實驗條件誘導(dǎo)至第2w和第4w時，收獲細(xì)胞。應(yīng)用免疫

2、組化法檢測誘導(dǎo)后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)心肌特異性肌鈣蛋白T(cTnT)、連接蛋白43(CX-43)，血管內(nèi)皮細(xì)胞表面抗原標(biāo)志CD31及肌性標(biāo)志α-橫紋肌肌動蛋白(α-SCA)的表達(dá)情況。應(yīng)用RT-PCR法檢測各組早期心肌細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子GATA4、NKX2.5、β-MHC及成熟心肌細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子α-MHC基因的表達(dá)情況，并進(jìn)行簡單量的比較。 結(jié)果： 免疫組化檢測：實驗組誘導(dǎo)2w后，cTnT、CX-43表達(dá)陰性或低表達(dá)

3、，誘導(dǎo)4w后呈陽性表達(dá)，實驗組較對照組有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，實驗組之間無顯著差異(P>0.05)；對照組及B組無CD31表達(dá)，C，D，E組表達(dá)呈弱陽性，組間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；α-SCA誘導(dǎo)前骨髓間充質(zhì)細(xì)胞中既有低度表達(dá)，誘導(dǎo)后濃度明顯增高，實驗組間無差異(P>0.05)。 RT-PCR表達(dá)情況：實驗組誘導(dǎo)2w后條帶不明顯；誘導(dǎo)4w后均表達(dá)GATA4，NKX2.5，β-MHC，無α-MHC表達(dá)，從條帶密度和亮度

4、分析，實驗組較對照組有顯著差異(P<0.05)，實驗組間無顯著差異(P>0.05)。 結(jié)論： 1.5-氮雜胞苷可以誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化。 2.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞因其“環(huán)境依賴性分化”特性，具有分化為心肌細(xì)胞的潛能。心肌細(xì)胞裂解液和細(xì)胞間接接觸模擬的心肌微環(huán)境也可以誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化成心肌樣細(xì)胞，且誘導(dǎo)的效果與誘導(dǎo)的時間及誘導(dǎo)劑濃度相關(guān)，分化的細(xì)胞介于成熟的心肌細(xì)胞和心肌祖細(xì)胞之間的心肌細(xì)胞前體。