NBS1、XPC基因單核苷酸多態(tài)與宮頸癌易感性相關(guān)研究.pdf

1、目的:
　　宮頸癌被認(rèn)為是第二常見的發(fā)生在婦女身上的惡性腫瘤,83％的案例發(fā)生在發(fā)展中國家。目前己經(jīng)確定,人乳頭瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染是宮頸癌發(fā)生的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素。盡管許多婦女都感染了高危型的HPV,但最終發(fā)展成為宮頸癌的婦女僅僅是一小部分,這表明了遺傳易感性也是宿主感染HPV后能否發(fā)展成為腫瘤的關(guān)鍵性因素。
　　從遺傳角度看,人與人之間之所以存在各種各樣的差異,是由于個(gè)體間存在著

2、基因型的差異。基因的多態(tài)構(gòu)成了基因型的差異,而單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism,SNP)又是基因多態(tài)的三種類型中最為常見的一種,占所有已知多態(tài)性的90%以上。本研究擬通過判斷DNA損傷修復(fù)基因NBS1、XPC的多核苷酸多態(tài)位點(diǎn)各基因型在宮頸癌組和正常對照組中的分布,分析其與宮頸癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系。并且了解DNA損傷修復(fù)基因NBS1、XPC單核苷酸多態(tài)性與宮頸癌病理分類的關(guān)系;了解DNA損傷修

3、復(fù)基因NBS1、XPC的單核苷酸多態(tài)性與宮頸癌臨床分期的關(guān)系。從中探討NBS1、XPC基因單核苷酸多態(tài)性與行為危險(xiǎn)因素間的相互關(guān)系對宮頸癌易感性的影響,為臨床上預(yù)防和早期治療宮頸癌提供了一個(gè)全新的方向。
　　材料與方法:
　　本研究收集了139例宮頸癌患者及264例健康對照者的血液樣本,并提取基因組DNA。其中病例組的樣本來自于2008年-2011年廣東省婦幼保健院就診的并且經(jīng)過組織病理學(xué)確診的宮頸癌患者的血液樣品。而對照組

4、樣本來自于宮頸組織正常者(同期到我院行全子宮切除患者,術(shù)后病理確診無宮頸癌及癌前病變)。在收集血液標(biāo)本的同時(shí),我們收集每個(gè)研究對象詳細(xì)的人口學(xué)資料(包括了年齡、首次性生活年齡、性伴侶個(gè)數(shù)、產(chǎn)次、初產(chǎn)年齡、性傳播疾病史、腫瘤家族史、吸煙、社會(huì)經(jīng)濟(jì)條件和受教育程度等資料)。所有病例組患者與對照組個(gè)體間均無血緣關(guān)系,均知情同意。
　　根據(jù)文獻(xiàn)選取DNA損傷修復(fù)基因NBS1、XPC的Glu185Gln、Lys939Gln、Ala499Va

5、l為研究位點(diǎn),各位點(diǎn)在中國漢族人群中的最小基因型頻率大于5%。采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)(PCR-RFLP)方法對各多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行基因分型。應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。利用Goodness-of-fit χ2檢驗(yàn)對健康對照組多態(tài)位點(diǎn)的基因型分布進(jìn)行分析并確認(rèn)其是否符合Hardy-Weinberg平衡;Pearson’s χ2檢驗(yàn)比較宮頸癌患者與健康對照組的基因型分布差異是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;多因素非條件邏輯回歸計(jì)算比值比(o

6、dds ratios,OR)及其95%置信區(qū)間CI,分析基因型與宮頸癌發(fā)生危險(xiǎn)性的關(guān)系,并且使用年齡進(jìn)行校正。所有的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均為雙側(cè)概率檢驗(yàn)。
　　結(jié)果:
　　本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,宮頸癌組與健康對照組在年齡、性伴侶個(gè)數(shù)、第一次性生活年齡、吸煙習(xí)慣等方面是無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.732;P=0.156;P=0.705;P=0.377),但初產(chǎn)年齡及懷孕次數(shù)在兩組間是有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的(P<0.001)。在對照組中NBS1、XP

7、C基因Glu185Gln、Lys939Gln、Ala499Val各位點(diǎn)基因型基因頻率分布符合Hardy-Weinberg平衡。
　　1.NBS1基因Glu185Gln(rs1805794)多態(tài)位點(diǎn)在病例組與對照組間基因型頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.480,P=0.024)。通過非條件邏輯回歸統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn),以CC基因型作為參照,GC和GG基因型均與其進(jìn)行比較,可發(fā)現(xiàn)每增加一個(gè)等位基因G,患宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)就會(huì)增加(GC的OR=1.6

8、57,95%CI=0.97-2.83;GG的OR=2.231,95%CI=1.25-3.99)。并且GG基因型增加個(gè)體患宮頸癌風(fēng)險(xiǎn)的趨勢在Ⅰ期的宮頸癌患者中更加顯著(GG vs CC:調(diào)整后的OR=3.703,95%CI=1.559～8.798,P=0.003)。
　　2.XPC基因Lys939Gln(rs2228001)多態(tài)位點(diǎn)的Lys/Lys(AA)、Lys/Gln(AC)和Gln/Gln(CC)基因型在對照組中基因型頻率分別

9、為43.2%、43.2%和13.6%,宮頸癌患者中分別為44.6%、39.6%和15.8%,通過Pearson’s X2檢驗(yàn),得到宮頸癌患者與對照組的基因型分布差異無顯著性(χ2=0.629,P=0.730)。通過非條件邏輯回歸統(tǒng)計(jì)分析,在Lys939Gln位點(diǎn)中以Lys/Lys基因型作為參照,Lys/Gln和Gln/Gln基因型與其進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)均與宮頸癌易感無相關(guān)性(OR值分別為0.890和0.789,95%CI分別為0.482～1

10、.468和0.425~1.468)。
　　3.XPC基因Ala499Val(rs2228000)多態(tài)位點(diǎn)的的Ala/Ala(CC)、Ala/Val(CT)、Val/Val(TT)基因型在病例組中的頻率分別為34.5%、44.6%和20.9%,在對照組中分別是39.4%、45.5%和15.2%,兩組間基因型頻率分布差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.320,P=0.313)。通過非條件邏輯回歸統(tǒng)計(jì)分析,在Ala499Val位點(diǎn)中,以Ala

11、/Ala基因型作為參照,Ala/Val、Val/Val基因型與其進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)其與宮頸癌易感無相關(guān)性(OR值分別為0.637和0.713,95%CI分別為0.354～1.146和0.404～1.257)。
　　結(jié)論:
　　1.NBS1 Glu185Gln基因多態(tài)性可能與廣東地區(qū)漢族婦女宮頸癌的發(fā)生相關(guān),G等位基因可能是影響宮頸癌易感的一個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素。攜帶NBS1 Glu185Gln G等位基因的個(gè)體較攜帶C等位基因個(gè)體發(fā)生宮頸

12、癌的風(fēng)險(xiǎn)高1.49倍。因此檢測NBS1 Glu185Gln基因多態(tài)性可能成為檢測宮頸癌的一個(gè)有效腫瘤標(biāo)志物。
　　2.NBS1 Glu185Gln G等位基因增加個(gè)體患宮頸癌風(fēng)險(xiǎn)的趨勢在Ⅰ期的宮頸癌患和宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者中更加顯著,是攜帶NBS1 Glu185Gln C等位基因的個(gè)體的1.71倍和1.76倍。
　　3.XPC基因的Lys939Gln、Ala499Val多態(tài)位點(diǎn)在宮頸癌組及對照組的基因型頻率分布無顯著的差異,廣