人hNTKL-BP1基因在HCC中的表達(dá)及Rbx1相互作用蛋白的篩選研究.pdf

1、1．人hNTKL-BPJ1基因在HCC中的表達(dá)肝癌是世界最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，本文主要探討N端激酶結(jié)構(gòu)樣蛋白結(jié)合蛋白基因(hNTKL-BP1)在人類原發(fā)性肝癌及癌旁肝組織中的表達(dá)并建立采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RFQ-PCR)技術(shù)研究hNTKL-BP1表達(dá)差異的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)準(zhǔn)確性好、重現(xiàn)性高，可定量分析基因表達(dá)水平，本文采用該技術(shù)的一種稱為2<'-△△Ct>方法的計(jì)算方法分析比較該基因在人類肝癌組織和癌旁肝組織中的表

2、達(dá)差異。 44例原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)組織樣品的檢測(cè)結(jié)果顯示肝癌組織中hNTKZ-BP1基因表達(dá)水平顯著高于癌旁肝組織(t=2.69，P<0.01)。結(jié)合臨床病理資料分析，我們發(fā)現(xiàn)在44例肝癌組織與癌旁肝組織hNTKL-BP1基因表達(dá)差異和腫瘤大小有一定的相關(guān)性(P=0.028)，腫瘤越大，hNTKL-BP1基因表達(dá)上調(diào)越明顯。該研究成功建立RFQ-PCR檢測(cè)hNTKL-BP1mRNA含量的方法，具有較好的檢測(cè)靈敏度和重復(fù)性，hNTK

3、L-BP1基因可能與肝癌的發(fā)生、發(fā)展有一定相關(guān)性。 2.Rbx1相互作用蛋白篩選研究Rbx1蛋白是泛素連接酶E3復(fù)合物——SCF復(fù)合物的組成成分，能與cullin-1形成異源二聚體從而催化泛素化進(jìn)程，在蛋白的泛素化過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用。本研究主要以Rbxl作為酵母雙雜交的誘餌，通過(guò)酵母雙雜交篩選，我們得到了三個(gè)能夠與Rbx1發(fā)生相互作用的已知蛋白：SERTAD1蛋白、OS9蛋白、HAX1蛋白。生物信息學(xué)預(yù)測(cè)HAXl蛋白有PES

4、T結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域被認(rèn)為是死亡結(jié)構(gòu)域，與泛素化相關(guān)，普遍認(rèn)為HAX1蛋白是個(gè)抗凋亡蛋白。因此我們對(duì)Rbx1與HAX1相互作用進(jìn)行了進(jìn)一步研究， Rbx1與HAX1蛋白相互作用的特異性通過(guò)酵母體內(nèi)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)、體外GST Pull down實(shí)驗(yàn)得到驗(yàn)證。根據(jù)Rbx1與HAX1相互作用的研究，對(duì)它們的生物學(xué)意義進(jìn)行討論和思考，我們猜測(cè)Rbx1可能通過(guò)與HAX1相互作用，影響HAX1的泛素化，從而導(dǎo)致其降解，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。上述工作對(duì)HAX1的