共刺激分子B7-H1對小鼠髓源性抑制細(xì)胞免疫抑制功能的調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、目的:隨著機(jī)體衰老,年齡相關(guān)疾病包括腫瘤發(fā)病率顯著增高,提示衰老與免疫功能相關(guān)。髓源性抑制細(xì)胞是一群功能強(qiáng)大的免疫抑制性細(xì)胞群體,其在腫瘤免疫逃逸中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。但是,衰老與MDSCs功能的關(guān)系,特別是作用機(jī)制并不清楚。因此,本課題目的在于探究髓源性抑制細(xì)胞(MDSCs)上協(xié)同刺激分子(B7-H1)在增齡相關(guān)MDSCs免疫抑制功能中的作用。
　　方法:健康C57BL/6J老年組(18個月齡)及青年組(6-8周齡)小鼠各18只。通

2、過流式細(xì)胞分析法測定各組小鼠MDSCs上負(fù)性協(xié)同刺激因子(B7-H1,B7-H3,B7-H4及CD40)的表達(dá)水平,并分別通過免疫磁珠分選法及小鼠淋巴結(jié)研磨方法,選得MDSCs及T細(xì)胞。T細(xì)胞增殖干預(yù)實驗分5組進(jìn)行:T細(xì)胞羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂(CFSE)未標(biāo)記組;T細(xì)胞CFSE標(biāo)記組;T細(xì)胞標(biāo)記CFSE+老年MDSCs組;T細(xì)胞標(biāo)記CFSE+青年MDSCs組以及T細(xì)胞標(biāo)記CFSE+老年MDSCs+B7-H1抗體阻斷組,在CD3

3、連和CD28提供刺激信號的前提下進(jìn)行混合培養(yǎng),觀察青年和老年MDSCs抑制T細(xì)胞增殖的差異,并評估B7-H1是否為造成這種差異的關(guān)鍵分子。運用realtimePCR方法篩選青和老年MDSCs中可能與B7-H1表達(dá)相關(guān)的差異性基因;在此基礎(chǔ)利用添加實驗,體外分析老齡MDSCs表達(dá)B7-H1的調(diào)控機(jī)制。
　　結(jié)果:①與青年組比較,老年組MDSCs表達(dá)B7-H1水平顯著升高(t=3.27,P<0.05)。
　?、诶夏杲MMDSCs能

4、明顯抑制T細(xì)胞的增殖(t=5.42,P<0.05)而青年組MDSCs對T細(xì)胞的干預(yù)作用不明顯(t=0.64,P>0.05),老年MDSCs加B7-H1抗體阻斷組T細(xì)胞增殖被明顯逆轉(zhuǎn),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=8.28,P<0.05),提示B7-H1在增齡相關(guān)MDSCs抑制功能中發(fā)揮了重要作用。
　?、踧RT-PCR以及MDSCs刺激試驗結(jié)果顯示炎性因子IL-10是青年和老年MDSCs上B7-H1差異性表達(dá)的重要調(diào)控機(jī)制。
　　結(jié)