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1、目的:通過復(fù)制已成型的下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥模型兔制作方法,制作兔下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥模型,并進(jìn)一步驗(yàn)證模型的成功率。在此基礎(chǔ)上,再利用自制循環(huán)壓力泵增加局部閉塞血管兩端壓力的特性,達(dá)到增加狹窄段血管血流量的效果,從而達(dá)到改善跛行癥狀,為臨床上延緩甚至避免患者病情進(jìn)一步發(fā)展創(chuàng)造條件。
方法:⑴兔右下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥模型的制作:30只體重2.5~3.5 kg健康成年本地雄性兔,以高脂飼料每天300g/只的劑量對(duì)其進(jìn)行喂養(yǎng)兩天后,取右側(cè)
2、腹股溝下搏動(dòng)明顯處縱行切口,切口長(zhǎng)約6~7 cm,標(biāo)記,常規(guī)消毒,鋪巾后切開皮膚及肌肉組織,暴露股動(dòng)脈,于無血管分支處,7號(hào)手術(shù)線繞動(dòng)脈3周將其口徑縮至約2/3(先將手術(shù)線繞動(dòng)脈2周,標(biāo)記,將標(biāo)記的長(zhǎng)度再環(huán)繞3周),以0號(hào)絲間斷縫合皮膚及皮下組織,術(shù)后肌注青霉素20萬(wàn)U/只,第7d靜脈注射牛血清白蛋白(250 mg/kg),繼續(xù)喂養(yǎng)高膽固醇飼料,共16周[1]。實(shí)驗(yàn)后觀察實(shí)驗(yàn)兔存活情況,術(shù)后兔子的運(yùn)動(dòng)情況,術(shù)后進(jìn)食情況,大便及小便的顏色
3、及性狀等指標(biāo);抽取造模前一周和造模后16周空腹血作血清血脂和纖維蛋白原測(cè)定,TXB2、6-Keto-PGF1α、 ET-1、NO、ICAM-1測(cè)定結(jié)果,在16周時(shí)取一定數(shù)量的實(shí)驗(yàn)兔的右側(cè)股動(dòng)脈及右側(cè)大腿肌肉組織做病理切片并觀察。⑵自制壓力泵對(duì)血液生化影響實(shí)驗(yàn)(體外泵血)及自制壓力泵對(duì)實(shí)驗(yàn)兔泵血實(shí)驗(yàn)(體內(nèi)泵血):將具有下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥的24只實(shí)驗(yàn)兔,隨機(jī)分為2組,分為實(shí)驗(yàn)組A、對(duì)照組B,每組12只,A組用自制壓力泵對(duì)右下肢進(jìn)行泵血,B組
4、為自制壓力泵未對(duì)右下肢股動(dòng)脈進(jìn)行泵血。取原縱行切口,切口長(zhǎng)約6-7 cm,常規(guī)消毒,鋪巾后切開皮膚及肌肉組織,暴露股動(dòng)脈,找到股動(dòng)脈明顯狹窄處(第一部分實(shí)驗(yàn)絲線環(huán)縮處),在此狹窄處上2 cm處,以小號(hào)留置針穿刺股動(dòng)脈,收取所需血液行生化檢查。按照說明書要求安裝壓力泵,并裝上特制硅膠橡皮管。在壓力泵最大轉(zhuǎn)速(150轉(zhuǎn)/分)的條件下,在輸出端收取所需血液行生化檢查,關(guān)閉壓力泵。利用輸出段的小號(hào)留置針在輸入端穿刺點(diǎn)下約1 cm穿刺股動(dòng)脈,以轉(zhuǎn)
5、速50轉(zhuǎn)/分,啟動(dòng)壓力泵,持續(xù)給實(shí)驗(yàn)兔泵血1小時(shí)。術(shù)后觀察實(shí)驗(yàn)兔是否存活,術(shù)后實(shí)驗(yàn)兔的運(yùn)動(dòng)情況,術(shù)后進(jìn)食情況,大便及小便的顏色以及性狀等指標(biāo);體外泵血術(shù)前作ALT、AST、TBil、DBil、Cr、BUN、Na+、K+、Cl-、Ca2+、RBC、HGB、ESR;體外泵血術(shù)后Na+、K+、Cl-、Ca2+、RBC、HGB、ESR;體內(nèi)泵血術(shù)后抽取兔動(dòng)脈血作ALT、AST、TBil、DBil、Cr、BUN、Na+、K+、Cl-、Ca2+;平
6、均容積流量與平均血流速度;右下肢遠(yuǎn)端皮膚溫度;右下肢遠(yuǎn)端氧飽和度。
結(jié)果:①術(shù)后動(dòng)物存活情況:死亡4只,一只為術(shù)后第2天表現(xiàn)打噴嚏、鼻腔分泌物增多,呼吸困難、急促而死,體溫較高,解剖發(fā)現(xiàn)肺臟不均勻分布黃白色膿點(diǎn);一只為術(shù)后進(jìn)食量少、消瘦,在術(shù)后第4天死亡。一只為術(shù)后2天突然死亡,但經(jīng)尸檢未發(fā)現(xiàn)異常,原因不名;另一只在術(shù)后第2天開始腹瀉,進(jìn)食、進(jìn)水量少,無發(fā)熱,在術(shù)后第6天死亡;余26只動(dòng)物均存活至術(shù)后16周;②在術(shù)前術(shù)后飲食飲
7、水相同的情況下,發(fā)現(xiàn)存活動(dòng)物術(shù)后1~2天進(jìn)食量少,術(shù)后未見大小便顏色改變;③血生化指標(biāo):造模前后血脂和纖維蛋白原測(cè)定結(jié)果經(jīng)兩樣本t檢驗(yàn)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);④造模前后TXB2、6-Keto-PGF1α、ET-1、NO、ICAM-1測(cè)定結(jié)果經(jīng)兩樣本t檢驗(yàn)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;⑤術(shù)后病理切片可見股動(dòng)脈斑塊形成,肌肉組織可見肢體缺血、潰瘍或壞死;⑥動(dòng)物存活情況:A組未死亡,但一只因手術(shù)時(shí)間長(zhǎng),恢復(fù)時(shí)間為4小時(shí),其余均在2.5小時(shí)內(nèi)恢復(fù)活動(dòng)
8、;B組均在術(shù)后2小時(shí)后恢復(fù)活動(dòng);⑦兩組24只實(shí)驗(yàn)兔,體外泵血前后電解質(zhì)、血常規(guī)、血沉等指標(biāo)經(jīng)兩樣本t檢驗(yàn),結(jié)果均無顯著性差異(P>0.05);⑧A、B兩組24只實(shí)驗(yàn)兔,體內(nèi)泵血前后電解質(zhì)、肝功能、腎功能等指標(biāo),經(jīng)兩樣本t檢驗(yàn),結(jié)果均無顯著性差異(P>0.05),而體內(nèi)泵血后A、B兩組平均容積流量與平均血流速度、右下肢遠(yuǎn)端皮膚溫度、右下肢遠(yuǎn)端肢體血氧飽和度等指標(biāo),經(jīng)兩樣本t檢驗(yàn),結(jié)果顯示均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
結(jié)論:
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