沙利度胺通過(guò)降低磷酸化c-jun氨基末端激酶及α-平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)減輕博萊霉素所致大鼠肺纖維化.pdf

1、研究背景：肺纖維化是一種發(fā)病機(jī)制不明，累及肺泡、肺間質(zhì)和(或)細(xì)支氣管的彌漫性疾病，呈進(jìn)行性發(fā)展，是很多肺部疾病發(fā)展的最終結(jié)局。其病理特征是大量成纖維細(xì)胞的活化聚集和細(xì)胞外基質(zhì)的沉積。肺纖維化的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，因缺乏有效的治療手段，5年死亡率超過(guò)50％。為了提高肺纖維化患者的生存率及生活質(zhì)量，人們對(duì)其發(fā)病機(jī)制及治療方法的研究越來(lái)越多。近年來(lái)，沙利度胺作為一種有效的雙向免疫調(diào)節(jié)劑在骨髓纖維化、肝纖維化、腎纖維化及肺纖維化疾病的治療中發(fā)揮

2、作用，有研究證實(shí)其可通過(guò)抑制多種參與纖維化過(guò)程中的炎癥因子，如腫瘤壞死因子α（TNF-α），轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1），炎癥細(xì)胞的核因子NF-κB等，起到一定的抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用。信號(hào)通路在肺纖維化發(fā)病機(jī)制中的研究是近年來(lái)的熱點(diǎn)，其中絲裂原活化蛋白激酶家族中的c-jun氨基末端激酶（JNK）介導(dǎo)的信號(hào)通路備受關(guān)注。已有研究證實(shí)其參與了肺纖維化的發(fā)生與發(fā)展。TGF-β1作為重要的致纖維化因子，能夠磷酸化c-jun氨基末端激酶使其活化

3、發(fā)揮作用。但是關(guān)于沙利度胺是否能通過(guò)降低TGF-β1，繼而抑制JNK信號(hào)通路在肺纖維化中發(fā)揮作用未見(jiàn)報(bào)道。我們使用沙利度胺干預(yù)博萊霉素所致大鼠肺纖維化模型，來(lái)研究其可能作用機(jī)制。
　　目的：觀察沙利度胺在大鼠肺纖維化中的作用及對(duì)磷酸化c-jun氨基末端激酶及α-平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)的影響，進(jìn)一步分析沙利度胺在治療肺纖維化過(guò)程中可能的機(jī)制。
　　方法：將90只健康雄性Wistar大鼠（200g±20g）隨機(jī)分為對(duì)照組（N組）、模

4、型組(M組)、沙利度胺組（T組）、SP600125組（SP組）、SP600125+沙利度胺組（SP+T組），每組各18只，于氣管內(nèi)滴注博萊霉素注射液（按5mg/Kg溶于0.9%生理鹽水中至0.3ml）制備肺纖維化的模型，N組給予氣管內(nèi)滴注0.9%生理鹽水0.3ml；SP組和SP+T組于造模當(dāng)日給予SP600125（按15mg/Kg溶于DMSO液中至0.3ml）腹腔內(nèi)注射，其余三組給予DMSO液0.3ml腹腔內(nèi)注射，一次性給藥；T組，SP

5、+T組于造模當(dāng)日起給予沙利度胺片（按100mg/Kg溶于0.9%生理鹽水中至3ml）灌胃，其余三組給予0.9%生理鹽水3ml灌胃，一日一次。各組分別于第7、14、28天隨機(jī)選取6只大鼠，腹主動(dòng)脈放血處死，留取肺組織，石蠟包埋切片，行蘇木素-伊紅（HE）染色和Masson染色，光鏡下觀察大鼠肺組織的結(jié)構(gòu)、炎癥及纖維化等病理學(xué)的變化；堿水解法測(cè)大鼠肺組織中羥脯氨酸（Hyp）的含量，免疫組化法及Westernblotting檢測(cè)大鼠肺組織中p

6、-JNK蛋白及α-SMA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1、M組于第7天時(shí)出現(xiàn)明顯的肺泡炎癥性改變，第14天時(shí)肺泡的炎癥程度有所減輕，出現(xiàn)纖維化樣改變，第28天時(shí)形成明顯的纖維化樣改變。SP組、T組、SP+T組三組較M組比較，肺纖維化的程度均有所減輕，以SP+T組減輕更為明顯。2、N組羥脯氨酸的含量各時(shí)間點(diǎn)無(wú)明顯差異，其余4組隨著時(shí)間的延長(zhǎng)羥脯氨酸的含量逐漸升高，于第28天時(shí)達(dá)高峰，第14、28天時(shí)M組、SP組、T組、SP+T組較N組明顯

7、升高（P＜0.05），SP組、T組、SP+T組較M組含量低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；第28天時(shí)SP+T組較SP組、T組含量低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。3、免疫組化結(jié)果：M組各時(shí)間點(diǎn)p-JNK蛋白與α-SMA較N組均表達(dá)增加，以第14天時(shí)最明顯（P＜0.05）。與M組相比較，SP組、T組、SP+T組p-JNK蛋白與α-SMA表達(dá)均有所下降，以14天時(shí)最為明顯（P＜0.05）；第14、28天時(shí)SP+T組α-SMA表達(dá)較S

8、P組、T組兩組降低（P＜0.05）；第14、28天時(shí)T組較SP組、SP+T組兩組比較p-JNK蛋白表達(dá)高（P＜0.05）。4、Westernblotting結(jié)果：M組p-JNK蛋白及α-SMA各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)均較N組增加，以第14天最為明顯（P＜0.05）；各時(shí)間點(diǎn)SP組、T組及SP+T組的p-JNK蛋白及α-SMA的表達(dá)較M組降低，但仍高于N組（P＜0.05）；SP+T組第14、28天時(shí)α-SMA表達(dá)較SP組、T組兩組降低（P＜0.05）