沙利度胺通過抑制JNK信號通路抑制肺纖維化大鼠I型膠原的過度表達(dá).pdf

1、研究背景：肺纖維化是一類累及肺間質(zhì)、肺泡和（或）細(xì)支氣管的漸進(jìn)性加重的致命性肺部彌漫性疾病。其發(fā)病機(jī)制不清，起病隱匿，病死率高，預(yù)后較差，目前仍缺乏有效的臨床治療手段。所以近年來其發(fā)病機(jī)制和治療成為研究的熱點。現(xiàn)有研究證實，肺纖維化的主要病理特征為細(xì)胞外基質(zhì)（extracellularmatrix，ECM）的過度沉積。絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）是一種絲/蘇氨酸蛋白激酶，廣泛存在于哺乳動物細(xì)胞內(nèi)。c-jun氨基末端激酶（c-junN-

2、terminalkinase，JNK）是重要的MAPK家族成員。有研究表明JNK信號通路在轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforminggrowthfactor-β1，TGF-β1）誘導(dǎo)ECM，如纖維連接蛋白、I、III型膠原蛋白等過度聚集的過程中起重要作用。亦有研究顯示，沙利度胺可能通過抑制TGF-β1介導(dǎo)的信號通路來減輕纖BLM誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化。但是沙利度胺是否通過下調(diào)JNK信號通路抑制ECM過度沉積，從而減輕BLM誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化

3、未見報道。本實驗我們以Wistar大鼠為研究對象，觀察沙利度胺對肺間質(zhì)纖維化大鼠JNK信號通路及I型膠原蛋白的的影響，從而探討沙利度胺抑制肺間質(zhì)纖維化形成的信號通路機(jī)制，為肺纖維化提供新的臨床治療思路。
　　目的：以博萊霉素誘導(dǎo)大鼠肺纖維化，建立肺纖維化動物模型，通過觀察正常對照組、模型組、沙利度胺組、SP600125組和沙利度胺+SP600125組大鼠肺組織病理學(xué)的改變，檢測大鼠肺組織羥脯氨酸含量，同時觀察肺組織中I型膠原蛋白和

4、p-JNK蛋白的表達(dá)，分析沙利度胺是否通過抑制JNK信號通路抑制I型膠原蛋白在肺纖維化大鼠肺組織中的過度表達(dá)，從而減輕BLM誘導(dǎo)的大鼠肺間質(zhì)纖維化。
　　方法：90只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字法分為健康對照組(N組)、模型組（M組）、沙利度胺組（T組）、SP600125組（SP組）和沙利度胺+SP600125組（T+SP組），每組18只。M組于氣管內(nèi)滴注BLM0.9％氯化鈉注射液0.3ml（按5mg/kg），造模當(dāng)日腹腔內(nèi)注射DMSO液0.

5、3ml，自造模當(dāng)日起每日給予2ml生理鹽水灌胃；T組、SP組和T+SP組同樣方法造模，T組自造模當(dāng)日起每日給予沙利度胺片灌胃（按100mg/kg，溶于2ml生理鹽水），腹腔內(nèi)注射DMSO液0.3ml；SP組造模當(dāng)日腹腔內(nèi)注射SP600125溶液0.3ml（按15mg/kg，用DMSO溶解至0.3ml），一次性給藥，自造模當(dāng)日起每日給予2ml生理鹽水灌胃；T+SP組造模當(dāng)日腹腔內(nèi)注射SP600125溶液0.3ml（按15mg/kg，用DM

6、SO溶解至0.3ml），并于造模當(dāng)日起每日給予沙利度胺片灌胃（按100mg/kg，溶于2ml生理鹽水）；N組氣管內(nèi)滴注生理鹽水0.3ml，造模當(dāng)日腹腔內(nèi)注射DMSO溶液0.3ml，每日給予2ml生理鹽水灌胃。于造模后第7、14、28天采用腹腔放血法分別處死每組大鼠各6只，打開胸腔，剪取右肺上葉保存于-20℃冰箱，待測羥脯氨酸（Hyp）含量；取右肺下葉，中性甲醛固定，石蠟包埋、切片供病理學(xué)檢測。留取部分肺組織凍存與液氮中，進(jìn)行Wester

7、n印跡法檢測肺組織中p-JNK及I型膠原蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1、M組第7天形成典型的肺泡炎改變，第14天炎癥改變減輕，肺間質(zhì)中可見成纖維細(xì)胞增生，于第28天形成顯著肺纖維化，T組、SP組和T+SP組各時間點炎癥反應(yīng)及纖維化程度均較M組減輕。2、M組、T組、SP組和T+SP組的Hyp含量隨時間延長而升高，第28天Hyp含量達(dá)到最高。第14、28天M組、T組、SP組和T+SP組Hyp含量均顯著高于N組（P＜0.01)；T組、SP

8、組和T+SP組Hyp含量較M組顯著減少（P＜0.05)。3、M組各時間點I型膠原蛋白表達(dá)明顯增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05)；T組、SP組和T+SP組I型膠原蛋白表達(dá)顯著減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05)；T+SP組I型膠原蛋白表達(dá)均較SP組顯著，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05)。4、M組各時間點p-JNK蛋白表達(dá)較N組顯著增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05)變化趨勢為：第7天開始升高，第14天達(dá)到高峰，第28天開始下降。；