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1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文TRAIL基因重組卡介苗的構(gòu)建及對膀胱腫瘤殺傷作用的研究姓名：陳善聞申請學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)（泌尿外科學(xué)）指導(dǎo)教師：沈周俊20070501浙扛大學(xué)博士學(xué)位論文—摘要“TRAIL基因重組卡介苗的構(gòu)建及對膀胱腫瘤殺傷作用的研究TRAIL基因重組卡介苗的構(gòu)建及對膀胱腫瘤殺傷作用的研究浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院外科學(xué)(泌尿外科)博士研究生陳善聞導(dǎo)師沈周俊教授中文摘要一、研究目的獲得高效、穩(wěn)定表達(dá)腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TNF
2、relatedapoptosisinducingligandTRAII，)蛋白的重組卡介苗(BacilleCalmetteCuCrin，BCG)株；成功構(gòu)建膀胱腫瘤小鼠模型；證實(shí)重組BCG(rBCGTRAIL)比常規(guī)BCG等具有更強(qiáng)的抗膀胱腫瘤特性，毒副作用小。二、主要研究內(nèi)容1BCG穿梭表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定：分別采用RTPCR和PCR獲取TRAIL和A985B信號(hào)肽基因序列后，利用DNA重組技術(shù)將以上兩個(gè)片段先后插入穿梭質(zhì)粒pMV26
3、1的HSP60啟動(dòng)子下游，構(gòu)建分泌型BCG穿梭表達(dá)載體pMV261A985BTRAIL并轉(zhuǎn)化大腸桿菌、抽提和純化，對pMV261A985BTRAIL進(jìn)行酶切、PCR擴(kuò)增及DNA測序鑒定。2rBCGTRAIL的構(gòu)建：利用電穿孔技術(shù)將pMV261A985BTRAIL導(dǎo)入BCG構(gòu)建rBCGTRAIL，大量制各rBCGTRAIL，分別用PCR擴(kuò)增和Westernblotting檢測rBCGTRAIL菌體和培養(yǎng)上清中TRAIL的DNA和蛋白表達(dá)，
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