抗人T淋巴細胞CD4人-鼠嵌合抗體真核表達的研究.pdf

1、CD4屬于Ig超家族，為細胞膜表面單鏈糖蛋白，是HIV的主要受體。CD4+T細胞參與大多數(shù)自身免疫性疾病的發(fā)生，而抗CD4的抗體可清除或抑制CD4+T細胞，從而調節(jié)異常的T細胞應答。國外已對鼠源性抗CD4單抗用于治療類風濕性關節(jié)炎、全身性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病進行了廣泛而深入的研究，臨床療效良好。但是，鼠源性單抗應用于人體治療將引起人抗鼠抗體(HAMA)反應，反復使用可導致人體產生過敏反應且降低治療效果，將鼠單抗改造為人-鼠嵌合抗體能

2、降低HAMA反應。嵌合抗體臨床試用的大量研究表明，它臨床療效好，免疫原性與其它人源化抗體相似，而親和力常常高于其它人源化抗體。 本研究首先對質粒PAG4622+CD4VL和PAH4604+CD4VH進行雙酶切及DNA測序鑒定，證實其為含有鼠源性可變區(qū)和人源恒定區(qū)的嵌合抗體輕、重鏈表達載體。然后，繪制SP2/0細胞生長曲線確定SP2/0細胞最適生長條件，并通過抗生素篩選SP2/0細胞濃度的摸索，確定了組胺醇、霉酚酸聯(lián)合篩選對SP2

3、/0細胞的最低致死量為3.5mmol/L+1.1ug/ml。接著，采用電穿孔轉染質粒DNA的方法，將制備好的線性質粒PAH4604+CD4VH和PAG4622+CD4VL共轉染SP2/0細胞，通過組胺醇、霉酚酸聯(lián)合篩選4～6周，獲得了0925CASP2/0和1107CASP2/0兩株陽性SP2/0細胞株。最后，通過ELISA、流式細胞術、RT-PCR和DNA測序的方法對0925CASP2/0和1107CASP2/0細胞進行了初步鑒定。結