VIP對jurkat淋巴細胞株CD4表達的影響及其可能機制.pdf

1、研究背景：
　　血管活性腸肽（Vasoactive intestinal peptide，VIP）是一種常見的神經(jīng)肽，已有大量研究證實腫瘤細胞可分泌VIP，并且對多種免疫細胞均有調(diào)節(jié)作用，可促進CD4+T淋巴細胞向Th2分化，但其對于T淋巴細胞CD4/CD8表型的影響尚未見報道。Thpok是T淋巴細胞分化中重要而必需的轉(zhuǎn)錄因子，在陽性選擇過程中促進雙陽性T淋巴細胞向CD4+T淋巴細胞分化，并且維持成熟T淋巴細胞CD4的表型及抑制C

2、D8分子的表達。Thpok與轉(zhuǎn)錄因子Runx3的相互拮抗作用環(huán)是調(diào)節(jié)T淋巴細胞CD4/CD8分化的關(guān)鍵，而GATA3則在此過程中與Thpok表現(xiàn)出協(xié)同作用。T淋巴細胞的分化過程目前已逐漸明了，但關(guān)于已分化成熟的T淋巴細胞表型的改變的研究卻很少。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)胃癌組織中CD4表達較癌旁組織明顯升高，轉(zhuǎn)錄因子 Thpok也呈現(xiàn)相應(yīng)的變化，因此，我們推測腫瘤細胞可能通過分泌VIP促使已分化成熟的T淋巴細胞表型發(fā)生改變，并且該變化與 Thp

3、ok等轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)。為此，我們設(shè)計體外實驗探究 VIP對 jurkat淋巴細胞株CD4表達的影響及其可能機制。
　　目的：
　　體外實驗探究VIP對jurkat淋巴細胞株CD4表達的影響及其可能的機制。
　　方法：
　　分別檢測不同淋巴細胞株jurkat與molt-4之間CD4/CD8的表達及轉(zhuǎn)錄因子Thpok、Runx3及 GATA3之間的差異；用 VIP分別作用于靜息狀態(tài)下的 jurkat細胞及經(jīng)PMA+離子

4、霉素活化的jurkat細胞后，用流式細胞術(shù)檢測經(jīng)藥物作用后的各組細胞CD4及CD8表達的變化情況，用熒光定量PCR及免疫印跡法分別檢測Thpok、GATA3、Runx3的mRNA及蛋白變化。分析不同淋巴細胞株之間CD4/CD8表型不同的原因，探究各實驗組間jurkat細胞CD4表達差異的可能的機制。
　　結(jié)果：
　　1. jurkat細胞表面有VPAC1和VPAC2表達；
　　2. jurkat細胞高表達CD4，mol

5、t-4細胞高表達CD8（p＜0.05）；jurkat細胞的Thpok及Runx3的表達水平均明顯高于molt-4細胞（p＜0.05），但二者間Thpok的差異更為顯著；
　　3.當(dāng)10-6M VIP作用于jurkat細胞時，Thpok的表達明顯上調(diào)（P＜0.05）， VIP作用于jurkat細胞的實驗濃度為10-6M；
　　4．jurkat細胞活化后CD4、CD8的表達均上調(diào)，聯(lián)合VIP作用后CD4表達進一步增加（p＜0.0

6、5）；
　　5．a(chǎn).jurkat細胞活化后Thpok mRNA表達上調(diào)，聯(lián)合VIP作用后進一步增加（p＜0.05）；b.jurkat細胞活化后 Runx3 mRNA及蛋白表達均明顯上調(diào)（P＜0.05）；c.VIP刺激靜息狀態(tài)下的jurkat細胞GATA3蛋白表達呈上調(diào)趨勢。
　　結(jié)論：
　　1.已分化成熟的jurkat細胞仍具有可塑性，活化后CD4、CD8的表達均可上調(diào)；
　　2. VIP可誘導(dǎo)活化狀態(tài)下jurk