電磁脈沖對T淋巴細胞的影響及機制.pdf

1、電磁脈沖（Electromagneticpulse,EMP）作為一種特殊的高能復合電磁波，應用領域不斷擴展，其生物學效應和相關的作用機制已經成為國內外學者研究的熱點之一。免疫系統(tǒng)是機體抵御外來侵襲和損傷的主要防御體系，通過抗原的識別和應答，免疫防御、免疫監(jiān)視和免疫自穩(wěn)等機制維持機體的穩(wěn)態(tài)。因此研究電磁輻射對免疫系統(tǒng)的作用具有重要的意義。既往研究發(fā)現(xiàn)，電磁輻射對各種免疫細胞的增殖和凋亡和功能有不同程度的影響。目前有關電磁脈沖對T淋巴細胞作

2、用的相關研究報道不多。
　　目的：探討電磁脈沖對T淋巴細胞的影響及機制。
　　方法：
　　一、在體實驗
　　選用電磁脈沖輻射源(場強200kV/m,脈沖前沿3.5ns，脈寬14ns，重復頻率1Hz)對雄性BALB/c小鼠進行輻照，每天照射400次，連續(xù)照射7天，于照后不同時間處死小鼠觀察以下指標：
　　1.取胸腺和脾臟，用HE染色法觀察其組織形態(tài)的改變；
　　2.處死前稱取小鼠的體重、處死后對胸腺和脾

3、臟進行稱重，計算胸腺、脾臟指數(shù)；提取胸腺和脾臟淋巴細胞進行計數(shù)，觀察淋巴細胞數(shù)量的變化；
　　3.通過流式細胞儀檢測脾臟淋巴細胞中的T、B淋巴細胞比例的變化；
　　4.通過流式細胞儀檢測脾臟淋巴細胞的凋亡和細胞周期的改變；
　　5.通過Migrationassay實驗法檢測EMP照射不同次數(shù)（0次、100次、200次、400次），照后不同時間（1、3、7、14、28天），脾臟淋巴細胞遷移能力的變化；
　　6.通過

4、ELISA法檢測脾臟組織液中的SDF-1的表達水平；
　　7.通過Westernblotting實驗檢測脾臟淋巴細胞p-AKT的表達水平。
　　二、離體細胞實驗
　　用相同的EMP源輻照JurkatT細胞，觀察以下指標：
　　1.EMP照射0次（對照組）、100次、200次、400次；照后0h（對照組）、1h、3h、6h、12h、24h,通過Migrationassay檢測JurkatT細胞遷移能力的變化；

5、>　　2.用流式細胞儀檢測EMP照后JurkatT細胞膜上CXCR4的表達水平的改變；
　　3.用Westernblotting法檢測JurkatT細胞PI3K、p-AKT、PAK1、Rac1表達水平的變化。
　　4.采用ELISA方法檢測JurkatT細胞IL-4和IFN-γ表達水平的變化。
　　結果:
　　1.BALB/c小鼠在EMP輻照后，（1）胸腺結構沒有顯著的變化；輻照3天后，脾臟血竇擴張，充血明顯，脾

6、小體結構不清；（2）胸腺指數(shù)變化沒有統(tǒng)計學意義；脾臟指數(shù)呈現(xiàn)先增后減的趨勢，在照后第3、7天輻照組的脾臟指數(shù)高于對照組；胸腺淋巴細胞數(shù)的變化與對照組沒有顯著差異；脾臟淋巴細胞數(shù)在照后第3和7天，輻照組淋巴細胞數(shù)多于對照組；（3）輻照組脾臟中的T淋巴細胞數(shù)與對照組相比顯著增加，B淋巴細胞數(shù)改變不顯著；（4）輻照組和對照組脾臟淋巴細胞的凋亡數(shù)量和細胞周期的差異均無統(tǒng)計學意義；（5）400次EMP輻照組的淋巴細胞的遷移能力與對照組相比明顯增加

7、，照后1、3、7天脾臟淋巴細胞遷移能力增強；（6）EMP輻照后脾臟中的SDF-1表達量升高；（7）脾臟淋巴細胞的p-AKT的表達也相應的增加。
　　2.JurkatT細胞在EMP輻照后，（1）200次EMP輻照組的細胞遷移能力增加顯著；照后1h、3h、6h的細胞趨化能力與對照組相比增加明顯；（2）輻照后6h，JurkatT細胞表面CXCR4的表達量高于對照組；（3）JurkatT細胞PI3K、p-AKT、PAK1、Rac1表達水平

8、的變化與趨化能力的時間變化特征基本一致；（4）JurkatT細胞的IL-4的表達在照后3h、6h增高；IFN-γ在照后1h、3h、6h表達增加。
　　結論：在本實驗條件下，電磁脈沖對雄性BALB/c小鼠胸腺的作用不敏感，但對脾臟作用顯著。脾臟的組織結構遭到一定的破壞；脾臟重量增大，脾臟淋巴細胞數(shù)量增加，增加的主要是T淋巴細胞；但是淋巴細胞的凋亡和細胞周期沒有顯著的改變；脾臟中的趨化因子表達增加，脾臟淋巴細胞的遷移能力增強。Jurk