星形膠質(zhì)細(xì)胞上酸敏感離子通道1a在顳葉癲癇發(fā)生中的作用研究.pdf

1、癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)第二大常見疾病，最突出的特點(diǎn)為發(fā)作的反復(fù)性、不可預(yù)知性和藥物治療的長期性。即使經(jīng)系統(tǒng)規(guī)范化抗癲癇藥物治療，仍有接近1/3的患者癲癇發(fā)作未能得到有效控制，并最終進(jìn)展成為難治性癲癇，給病人及家屬帶來了極大的痛苦，因此探索治愈癲癇的途徑已成為神經(jīng)病學(xué)領(lǐng)域的重要課題。目前癲癇的治療藥物主要靶向于控制發(fā)作癥狀，對慢性癲癇形成的病理生理過程難以發(fā)揮逆轉(zhuǎn)作用，因此難以達(dá)到治愈癲癇的目的。這種情況下，探索新的針對癲癇發(fā)生的藥物有可能為治愈

2、癲癇帶來希望。大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和癲癇患者活檢證據(jù)表明，星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化增生是癲癇發(fā)生中重要的病理改變。我們課題組前期研究發(fā)現(xiàn)：星形膠質(zhì)細(xì)胞上的酸敏感離子通道1a（Acid Sensing Ion Channel1a，ASIC1a）在癲癇慢性期中表達(dá)增多，這種變化可能和癲癇慢性期的病理進(jìn)展有關(guān)，提示星形膠質(zhì)細(xì)胞上的ASIC1a可能參與癲癇發(fā)生的病理過程，并可能成為新的癲癇治療靶點(diǎn)。
　　目的:
　　研究星形膠質(zhì)細(xì)胞上ASIC1

3、a在小鼠顳葉癲癇發(fā)生中的作用。
　　方法:
　　分別構(gòu)建攜帶有星形膠質(zhì)細(xì)胞特異性啟動(dòng)子GFAP的Asic1a基因sh-RNA及ORF（open reading frame）的重組腺相關(guān)病毒（recombined adeno-associated virus，rAAV）載體(rAAV-GFAP-GFP-ASIC1a-shRNA，rAAV-GFAP-ASIC1a-GFP)，經(jīng)過立體定向注射感染海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞，敲低野生（WT）型

4、小鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞上 ASIC1a的表達(dá)，以及恢復(fù)Asic1a基因敲除（KO）小鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞上ASIC1a的表達(dá)。
　　使用雄性8周齡C57遺傳背景的WT和Asic1a基因敲除型KO小鼠，采用氯化鋰-匹羅卡品腹腔注射建立小鼠顳葉癲癇發(fā)生模型，在小鼠氯化鋰-匹羅卡品腹腔注射誘導(dǎo)癲癇持續(xù)狀態(tài)后3-5天進(jìn)行病毒載體立體定向注射和電極安裝，觀察小鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)發(fā)作后12-19天和5-6周4組實(shí)驗(yàn)小鼠：WT干擾組（下調(diào)ASIC1a表

5、達(dá)）、WT對照組、KO型表達(dá)重建組（恢復(fù)ASIC1a表達(dá)）和KO型對照組腦電圖發(fā)作和行為發(fā)作變化，結(jié)合免疫熒光染色方法進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:
　　1、小鼠海馬經(jīng)立體定向注射病毒后5周，超過90％的星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)綠色熒光蛋白（green fluorescence protein，GFP）。
　　2、小鼠氯化鋰-匹羅卡品腹腔注射后12-19天（慢性癲癇發(fā)生潛伏期），敲低WT小鼠海馬星型膠質(zhì)細(xì)胞ASIC1a表達(dá)以及恢復(fù)AS

6、IC1a KO小鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞上ASIC1a的表達(dá)對小鼠行為學(xué)發(fā)作以及 EEG癲癇樣放電無明顯影響。各組間潛伏期內(nèi)發(fā)作次數(shù)、發(fā)作程度 Rac ine評分和平均自發(fā)發(fā)作持續(xù)時(shí)間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。WT干擾組和WT對照組腦電功率值無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；KO型表達(dá)重建組和KO型對照組腦電功率值無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；KO型表達(dá)重建組腦電功率值與WT型干擾組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　3、小鼠氯化

7、鋰-匹羅卡品腹腔注射后5-6周（慢性癲癇發(fā)生期），WT鼠海馬星型膠質(zhì)細(xì)胞ASIC1a敲低組慢性自發(fā)性癲癇發(fā)作次數(shù)以及發(fā)作間期EEG放電強(qiáng)度明顯低于相應(yīng)對照組（P＜0.05）。KO小鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞上ASIC1a表達(dá)重建組慢性自發(fā)性發(fā)作次數(shù)以及發(fā)作間期EEG放電強(qiáng)度較相應(yīng)對照組明顯增多（P＜0.05）。各組間行為發(fā)作等級和平均每次自發(fā)發(fā)作時(shí)間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　在小鼠顳葉癲癇發(fā)生模型中，特異性抑