豬源益生乳酸菌的篩選及其菌劑制備技術研究.pdf

1、為研制出高活性飼用益生菌制劑替代仔豬飼料中添加的抗生素。本研究從健壯仔豬糞便中篩選出具有較強產酸能力的乳酸菌，并對菌株生長特性，耐受動物消化道逆環(huán)境能力、抑制病原菌、粘附小腸上皮細胞等益生特性及菌劑制備工藝進行研究。主要研究成果如下：
　?。?）豬源乳酸菌的篩選及鑒定。通過添加溴甲酚紫指示劑的MRS進行初次篩選，得到26株疑似目標菌株；經(jīng)過耐酸耐膽鹽復篩，得到7株對低pH和高濃度膽鹽具有一定耐受能力的菌株。通過生理生化、分子生物等

2、手段將其中耐酸耐膽鹽性能最好的兩株菌分別鑒定為植物乳桿菌NCU156和戊糖片球菌NCU301。
　?。?）NCU156生長特性。NCU156能夠產生大量的乳酸使培養(yǎng)基pH降低至3.6左右。0-2 h是生長延滯期，2-12 h是對數(shù)期，12-32 h是穩(wěn)定期，32 h以后為衰亡期。
　　（3）NCU156動物胃腸道環(huán)境耐受性。NCU156在pH2.5的MRS中4 h存活率為87.31％。在3 g/L的膽鹽濃度下4 h存活率仍有

3、41.88%；在模擬胃液中處理4 h菌數(shù)稍有增加（P＞0.05），接入模擬腸液后10 h活菌數(shù)在108 CFU/mL以上，說明NCU156能夠順利達到動物腸道。
　　（4）NCU156粘附性能。NCU156粘附能力在一定范圍內呈菌濃度和Ca2＋濃度依賴性，在作用2 h粘附達到平衡，在穩(wěn)定期中期（20 h）粘附最穩(wěn)定；對病原菌粘附的抑制作用中，排斥性的粘附抑制作用效果最強，其次是競爭性的粘附抑制，最后是置換性的粘附抑制。
　　

4、（5）NCU156抑菌性能。NCU156對常見7株致病菌的抑菌性研究表明，對銅綠假單胞菌抑制效果最好，抑菌圈的直徑達23 mm以上，菌體沒有抑菌性；發(fā)酵液抑菌性不受高溫、過氧化性酶、蛋白酶等處理方式的影響，故其抑菌性可能主要來源于所產生的乳酸； NCU156藥敏結果顯示其對四環(huán)素類、青霉素類抗生素敏感，對頭孢類、糖肽類、喹諾酮類抗生素均耐藥。
　　（6）NCU156菌劑制備工藝優(yōu)化。以活菌數(shù)為指標通過單因素實驗和BOX-Behnk