豬源益生乳酸菌的篩選及發(fā)酵工藝研究.pdf

1、從健康豬糞便篩選分離到有較強(qiáng)抑菌特性的3株乳酸菌，主要生理生化實(shí)驗(yàn)和16S rDNA保守序列分析初步鑒定為干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)、屎腸球菌(Enterococcus faecium)和糞腸球菌(Enterococcus faecalis)。體外益生特性研究表明，3株乳酸菌能耐受胃腸道環(huán)境，黏附豬小腸表面粘液，對(duì)豬源產(chǎn)腸毒素型大腸桿菌Escherichia coli O139、Ecoli C83905、Eco

2、li C83524、Ecoli C83529，傷寒沙門氏菌Salmonella typhimurium O4Hi、金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus均有較強(qiáng)的抑制特性。小鼠試驗(yàn)證明3株乳酸菌安全可靠。對(duì)添加乳酸菌后小白鼠大腸桿菌數(shù)量的變化進(jìn)行了研究，結(jié)果表明對(duì)照較添加乳酸菌組大腸桿菌數(shù)量明顯降低(P<0.05)。用Ecoli C83905腹腔攻毒小白鼠，乳酸菌組的死亡率明顯低于對(duì)照組。 通過單因素試驗(yàn)確定3

3、株乳酸菌最適合的碳氮源、營(yíng)養(yǎng)因子、緩沖鹽以及最佳接種量、溫度、起始pH、裝液量；應(yīng)用均勻設(shè)計(jì)法結(jié)合二次多項(xiàng)式回歸分析，篩選了E.faecalis的增菌培養(yǎng)基組分：蔗糖1.5％，酵母膏3.0％，磷酸鹽緩沖液50％，MgSO<,4>·7H<,2>O 0.0058％，MnSO<,4>·4H<,2>O 0.025％，番茄汁15％，pH6.8。該菌株在此增菌培養(yǎng)基37℃下培養(yǎng)18 h，菌數(shù)可達(dá)到8.0x10<'9>cfu/mL，增殖效果是經(jīng)MRS

4、培養(yǎng)后的3倍。進(jìn)一步流加堿液控制培養(yǎng)基pH，18 h后E.faecalis菌數(shù)可達(dá)到9.0x10<'9>cfu/mL。 研究了蔗糖、乳糖、L-谷氨酸、半胱氨酸、脫脂奶粉、甘油、維生素C、殼聚糖、海藻糖等對(duì)E.faecalis的冷凍干燥保護(hù)效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：?jiǎn)我槐Ｗo(hù)劑使用時(shí)，海藻糖保護(hù)效果最好，菌株凍干存活率為74％；脫脂乳、蔗糖和山梨醇協(xié)同作用時(shí)，凍干保護(hù)效果略優(yōu)于海藻糖(P<0.05)，凍干存活率為78％。常溫常壓狀態(tài)下五個(gè)月，

5、3株乳酸菌E.faecium、E.fecalis和L.casei的凍干菌粉，活菌數(shù)存活率分別為68.5％、70.2％和65.8％，表明乳酸菌凍干菌粉的保存性較好。 將這3株乳酸菌分別發(fā)酵，按菌數(shù)為1:1：1混合，真空冷凍干燥后，用于仔豬飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。選取64頭(杜×長(zhǎng)×大)仔豬，分為5組：基礎(chǔ)日糧對(duì)照組、抗生素對(duì)照組、乳酸菌高、中、低劑量試驗(yàn)組。通過平均增重、料肉比、發(fā)病情況(仔豬腹瀉發(fā)病率及程度、死亡率等)探討乳酸菌益生素的作用效