胚胎干細胞對博萊霉素所致小鼠肺損傷的治療作用初探.pdf

1、目的：比較三種不同種類的胚胎干細胞(embryonic stem cells ESC)即C57BL/6J-ESC、SS-ESC和人-ESC對博萊霉素所致C57BL/6J小鼠肺損傷的治療作用。選擇出治療作用最佳的細胞，并研究多次注射該細胞對肺損傷的治療作用，為以后的研究提供參考。 方法： 一、探索適合本研究的博萊霉素劑量 1、動物分組：C57BL/6J雌性小鼠40只，根據(jù)氣管內(nèi)注射博萊霉素劑量分別命為實驗組1、2、

2、3組，每組各12只；對照組4只，共四組； 2、動物模型制作：實驗1、2、3組分別經(jīng)氣管注入6 mg/kg、8 mg/kg、10mg/kg博萊霉素，對照組氣管內(nèi)注入生理鹽水； 3、觀察指標(biāo)：小鼠存活情況、體重變化以及肺組織的病理改變。 二、單次經(jīng)尾靜脈移植胚胎干細胞對博萊霉素誘導(dǎo)的小鼠肺組織損傷的治療作用探索 l、動物分組：C57BL/6J雌性小鼠50只，隨機分為五組，分別為：空白對照組、模型組、模型+C57

3、BL/6J胚胎干細胞組、模型+S8-胚胎干細胞組、模型+人胚胎干細胞組，每組10只； 2、動物模型制作及胚胎干細胞移植：除空白對照組外，其余四組均經(jīng)氣管給予博萊霉素制做肺損傷模型，三組干細胞給予組小鼠在造模后一小時，分別經(jīng)尾靜脈移植1.0×10<'9>/ml的C57BL/6J胚胎干細胞，S8胚胎干細胞和人胚胎干細胞，模型組給予相同體積的生理鹽水。 3、觀察指標(biāo)：小鼠生存時間、肺組織病理變化、肺組織羥脯氨酸含量的測定和干細

4、胞肺內(nèi)定植情況檢測。 三、兩次經(jīng)尾靜脈移植胚胎干細胞對博萊霉素誘導(dǎo)的小鼠肺損傷的治療作用探索 1、動物分組：C57BL/6J雌性小鼠30只，隨機分成3組，每組10只，分別為：博萊霉素模型組(簡稱：模型組)和實驗1組(單次移植S8ESC)以及試驗2組(兩次移植S8ESC)； 2、動物模型制作及胚胎干細胞移植：SSESC移植組小鼠在造模后一小時，分別經(jīng)尾靜脈移植1.0×10<'6>/ml的S8ESC，模型組給予相同體

5、積的生理鹽水，試驗2組在造模后第三天再次注入S8ESC，模型組以及試驗1組給予相同體積的生理鹽水； 3、觀察指標(biāo)：小鼠生存時間、肺組織病理變化、肺組織羥脯氨酸含量的測定。 結(jié)果： 一、博萊霉素劑量的探索結(jié)果： 小鼠氣管內(nèi)滴注博萊霉素，可以造成C57BL/6小鼠的間質(zhì)增生和肺組織實變，這種病變給藥1周即可出現(xiàn)，2周后加重，并且各實驗組相繼有小鼠發(fā)生死亡，大部分于試驗后7-12天死亡，其中實驗3組未及實驗終點

6、(14天)即全部死亡；8 mg/kg組比6 mg/kg組病變明顯。兩種劑量可酌情選用，本課題以觀察胚胎干細胞對博萊霉素所致小鼠肺損傷的治療效果為主要目的，故選8mg/kg為宜。 二、單次經(jīng)尾靜脈移植胚胎干細胞對博萊霉素誘導(dǎo)的小鼠肺組織損傷的治療作用探索： 1、死亡率比較：三組胚胎干細胞(ESC)給予組小鼠第八天死亡率較模型組明顯降低，(模型組為50％，C57BL/6J-ESC組為37.5％，S8-ESC組為20％，人-E

7、SC組為20％)； 2、病理變化：S8-ESC移植組，肺組織病理變化明顯輕于模型組，其他干細胞移植組與模型組相似。 3、肺組織羥脯氨酸含量:S8-ESC移植組明顯低于模型組(P=0.0098，<0.01)，人．ESC組與模型組比較，p=0.0402，<0.05，>0.01，)；C57BL/6J-ESC組與模型組比較差別不明顯(P=0.0627，>0.05)。 4、三種胚胎干細胞移植后分別于1、3、12、和24小時

8、取材，均可檢測到其在肺內(nèi)停留的信號，但以3小時取材組信號最強。3天后肺內(nèi)所有干細胞信號消失。 三、兩次經(jīng)尾靜脈移植胚胎干細胞對博萊霉素誘導(dǎo)的小鼠肺損傷的治療作用探索： 1、死亡率比較：試驗2組14天及28天的死亡率均低于對照組以及試驗l組(試驗2組分別為70％、90％，對照組和試驗1組分別為100％、100％，試驗2組28天死亡率t檢驗P=0.027，<0.05，試驗1組與對照組無明顯差異)； 2、病理變化：移植