結(jié)直腸癌中Rac1、MMP-2及Ki-67的表達研究.pdf

1、目的：侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的兩個重要生物學特性，是一個極其復雜的多因素、多步驟過程。該過程受瘤細胞之間的粘附作用、對周圍細胞外基質(zhì)蛋白的降解能力以及瘤細胞遷移等因素影響。Rac1屬于小G蛋白，是細胞信號轉(zhuǎn)導的樞紐環(huán)節(jié)，被激活后作用于細胞骨架或其靶蛋白，從而在腫瘤細胞的形態(tài)與分化、運動與遷移、增殖與凋亡等惡性表型方面發(fā)揮生物效應。MMP-2是基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員之一，能夠降解細胞外基質(zhì)和基底膜，促進瘤細胞向周圍組織擴散，從而對腫瘤的侵襲

2、和轉(zhuǎn)移產(chǎn)生影響。Ki-67是一種較為肯定的細胞增殖核抗原，被認為是能可靠、全面的反應細胞群體增殖活性的客觀指標。
　　 本研究擬采用免疫組織化學鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶法（S-P法）聯(lián)合檢測75例結(jié)直腸癌組織中Rac1、MMP-2、Ki-67基因在蛋白水平上的表達情況，分析其表達與結(jié)直腸癌生物學行為及臨床病理特征（年齡、性別、腫瘤的大小、分化程度、Ducks分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）之間的關系，探討利用Rac1、MMP-2和Ki-

3、67作為分子標記物評估腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移潛能的可能性，為進一步開展結(jié)直腸癌的研究和臨床治療提供病理學依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.病例
　　 選取邢臺醫(yī)學高等?？茖W校第一附屬醫(yī)院（邢臺市第一醫(yī)院）病理科2006年9月～2008年10月期間手術(shù)切除經(jīng)病理診斷確診的75例結(jié)直腸癌標本的存檔蠟塊。年齡25-78歲，中位年齡58歲。發(fā)生部位：結(jié)腸癌29例，直腸癌46例。按照2000年WHO新的結(jié)直腸腫瘤組織學分級標準分類：

4、高分化腺癌（Ⅰ級）19例，中分化腺癌（Ⅱ級）31例，低分化腺癌（Ⅲ級）25例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組46例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組29例。（根據(jù)Ducks分期）A期11例，B期13例，C期23例，D期28例。選取經(jīng)纖維結(jié)腸鏡及病理檢查未發(fā)現(xiàn)異常的大腸黏膜標本12例作為對照。所有患者均為散發(fā)病例，且為初次手術(shù)，術(shù)前均未經(jīng)放射治療或化療。
　　 2.免疫組化染色及結(jié)果判定
　　 采用免疫組化S-P法對結(jié)直腸癌中的Rac1、MMP-2和Ki-

5、67表達情況進行半定量研究。Rac1表達定位于癌細胞的細胞質(zhì)和細胞膜，免疫陽性反應物呈黃色、棕黃色或棕褐色顆粒狀。MMP-2表達定位于癌細胞及少量間質(zhì)細胞的細胞質(zhì)，免疫陽性反應物呈黃色、棕黃色或棕褐色顆粒狀。Ki-67陽性反應為細胞核呈棕褐色，顆粒狀。每例均隨機觀察10個高倍視野（×400），根據(jù)鏡下棕色反應強度及陽性細胞數(shù)，用半定量積分法判定結(jié)果。
　　 3.統(tǒng)計學處理
　　 應用 SPSS10.0 for windo

6、ws統(tǒng)計軟件包對實驗結(jié)果進行x2檢驗、Spearman等級相關分析進行檢驗。
　　 結(jié)果：
　　 1.結(jié)直腸癌中Rac1表達情況：
　　 正常大腸黏膜組織中均未見Rac1蛋白表達，癌組織中Rac1蛋白陽性表達占76％，Rac1蛋白的陽性表達率明顯高于正常大腸黏膜（P<0.01）。Rac1蛋白在高、中、低分化結(jié)直腸癌中的陽性表達率分別為57.9％（11/19）、74.2％（23/31）、92％（23/25），不同分

7、化程度的結(jié)直腸癌組織中Rac1蛋白表達有顯著差別，隨著分化程度的降低Rac1蛋白表達呈逐步上升趨勢（P<0.05）；在Ducks分期A+B組Rac1蛋白陽性表達率為58.3％（14/24），C+D組陽性表達率為84.3％（43/51），隨著Ducks分期的增加Rac1蛋白表達呈逐步上升趨勢，統(tǒng)計學有顯著差別（P<0.05）；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織中Rac1蛋白陽性表達率為87％（40/46）明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組58.6％（17/2

8、9），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。
　　 2.結(jié)直腸癌中MMP-2表達情況：
　　 正常大腸黏膜組織均未見MMP-2蛋白表達。癌組織中MMP-2蛋白陽性表達占77.3％，在癌細胞和間質(zhì)細胞胞質(zhì)中均見不同程度的MMP-2陽性表達，但以癌細胞為主。癌組織中MMP-2蛋白的陽性表達率明顯高于正常大腸黏膜（P<0.01）。MMP-2蛋白在高、中、低分化結(jié)直腸癌中陽性表達分別為52.6％（10/19）、83.9％（26/31

9、）、88％（22/25），不同分化程度的結(jié)直腸癌組織中MMP-2蛋白表達有顯著差別，隨著分化程度的降低MMP-2蛋白表達呈逐步上升趨勢（P<0.05）；在Ducks分期A+B組MMP-2蛋白陽性表達率為58.3％（14/24），C+D組陽性表達率為86.3％（44/51），隨著Ducks分期的增加MMP-2蛋白表達呈逐步上升趨勢，有顯著差別（P<0.05）；伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織中MMP-2蛋白陽性表達為87％（40/46）明顯高

10、于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組62.1％（18/29），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　 3.結(jié)直腸癌中Ki-67表達情況：
　　 正常大腸黏膜上皮細胞大部分未見Ki-67蛋白表達，僅1例陽性細胞百分率為8％，呈弱陽性。癌組織中細胞陽性百分率明顯升高，占68％（51/75），其陽性表達率明顯高于正常大腸黏膜（P<0.01）。Ki-67蛋白在高、中、低分化結(jié)直腸癌中的陽性表達率分別為52.6％（10/19）、61.3％（19/3

11、1）、88％（22/25），不同分化程度的結(jié)直腸癌組織中Ki-67蛋白表達有顯著差別，隨著分化程度的降低Ki-67蛋白表達呈逐步上升趨勢（P<0.05）；在Ducks分期A+B組Ki-67蛋白陽性表達率為54.2％（13/24），C+D組蛋白陽性表達率為74.5％（38/51），不同Ducks分期的結(jié)直腸癌組織中 Ki-67蛋白表達有顯著差別，隨著Ducks分期的增加Ki-67蛋白表達呈逐步上升趨勢（P<0.05）；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸

12、癌組織中Ki-67蛋白陽性表達率為87％（40/46）明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組51.7％（15/29），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　 4.結(jié)直腸癌中Rac1、MMP-2和Ki-67表達的相互關系
　　 在75例結(jié)直腸癌中，Rac1和MMP-2表達呈正相關（r=0.65，P<0.01），有統(tǒng)計學意義。而Rac1和Ki-67表達無統(tǒng)計學相關性（r=0.8，P>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.R

13、ac1、MMP-2與Ki-67在結(jié)直腸癌組織中的表達明顯高于正常大腸粘膜，提示這三者的增高可能與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展有一定的聯(lián)系。
　　 2.直腸癌中Rac1、MMP-2和Ki-67蛋白表達與腫瘤的分化程度、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著關系，提示其增高可能促進結(jié)直腸癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。
　　 3結(jié)直腸癌中Rac1與MMP-2表達呈正相關，Rac1與Ki-67的表達無相關性。
　　 4.應用免疫組化S-P法聯(lián)合檢測Rac