GPI-CD80表達(dá)載體的構(gòu)建、在COS-7細(xì)胞的表達(dá)及其錨定功能的初步研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文GPI-CD80表達(dá)載體的構(gòu)建、在COS-7細(xì)胞的表達(dá)及其錨定功能的初步研究姓名：張雪申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：藥劑學(xué)指導(dǎo)教師：林敬明20070516摘要細(xì)胞表面受體( T C R ) 對(duì)主要組織相容性復(fù)合物( M H C ) - 抗原肽復(fù)合物的特異性識(shí)別為T(mén) 細(xì)胞活化提供了必需條件之一，即第一信號(hào)；第二信號(hào)又稱(chēng)共刺激信號(hào)( c o s t i m u l a t o r ys i g n a l ) ，由抗原遞呈

2、細(xì)胞( A P C ) 表面及T 細(xì)胞表面的共刺激分子的相互作用所提供。諸多參與T 細(xì)胞活化的共刺激分子中，最重要的是T 細(xì)胞表面C D 2 8 分子與A P C 表面相應(yīng)配體C D S 0 ( B 7 ．1 ) 和C D S 6 ( B 7 - 2 ) 的結(jié)合。若僅有第一信號(hào)而缺乏第二信號(hào)，將導(dǎo)致免疫無(wú)應(yīng)答。C D 8 0 分子作為參與細(xì)胞免疫應(yīng)答第二信號(hào)的重要分子，與腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸密切相關(guān)，大多數(shù)腫瘤細(xì)胞缺乏C D 8 0 分子

3、的表達(dá)，不能有效地啟動(dòng)第二信號(hào)，是其發(fā)生免疫逃逸的原因之一。利用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，將諸如C D 8 0 等共刺激分子表達(dá)于腫瘤細(xì)胞表面，能產(chǎn)生更多的致敏腫瘤細(xì)胞，后者誘導(dǎo)對(duì)抗親代腫瘤攻擊的保護(hù)性免疫。雖然基因轉(zhuǎn)染法在腫瘤免疫基因治療上起重要作用，但基因轉(zhuǎn)染法亦有其局限性，如原代細(xì)胞較難轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)染效率較低、基因的降解、基因整合后的潛在致瘤性問(wèn)題、耗時(shí)長(zhǎng)等，都阻礙了基因轉(zhuǎn)染法進(jìn)行腫瘤治療的臨床應(yīng)用。我們可以選擇一種不同的方法將C D S 0 分

4、子轉(zhuǎn)移至腫瘤細(xì)胞表面。通過(guò)分子～克隆技術(shù)，將糖基化磷脂酰肌醇( g l y c o s y lp h o s p h a t e d y l i n o s i t o l ，O P D 結(jié)構(gòu)與某種蛋白嵌合表達(dá)，此法制各的目的蛋白能借助G P I 結(jié)構(gòu)錨定于多種細(xì)胞膜表面，并可保持與其天然配體結(jié)合的能力，含G P I 結(jié)構(gòu)的蛋白能夠有效地對(duì)細(xì)胞表面進(jìn)行修飾，這種不通過(guò)基因轉(zhuǎn)染手段使目的蛋白在靶細(xì)胞膜上表達(dá)的方法叫蛋白轉(zhuǎn)染法，也稱(chēng)細(xì)胞表面

5、工程( c e l l - s u r f a c ee n g i n e e r i n g ) 。基于G P I 錨定蛋白的細(xì)胞表面工程技術(shù)，與傳統(tǒng)的基因轉(zhuǎn)染法相比有很多優(yōu)勢(shì)，例如：1 ) G P I 錨定蛋白可以錨定于難于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞；2 ) 減少細(xì)胞的培養(yǎng)時(shí)間而迅速改變細(xì)胞表面性狀；3 ) 表達(dá)于細(xì)胞膜的目的蛋白的量可以被精確控制；4 ) 不同種G P I 錨定蛋白可以相繼或同時(shí)錨定于同一種細(xì)胞膜。本實(shí)驗(yàn)分三部分介紹人G P I