PCR-STR定量分析在唐氏綜合征診斷及病因分析中的應(yīng)用.pdf

1、目的:唐氏綜合征(Down Syndrome，DS)又稱先天性愚型或21三體綜合征，是一種最常見的先天性染色體數(shù)目畸變，發(fā)病率高達(dá)0.13％，給家庭和社會(huì)帶來沉重的負(fù)擔(dān)，故迫切需要一種準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便地診斷唐氏綜合征的新方法。 短串聯(lián)重復(fù)序列(short tandem repeats,STR)是近年來發(fā)現(xiàn)的、廣泛存在于人類基因組的一類具有長(zhǎng)度多態(tài)性的DNA序列。它們一般由2～6對(duì)堿基構(gòu)成一個(gè)核心序列，核心序列在長(zhǎng)度上呈串聯(lián)重復(fù)排

2、列，重復(fù)次數(shù)通常在15～30次，主要由核心序列拷貝數(shù)目的變化產(chǎn)生長(zhǎng)度多態(tài)性。STR廣泛分布于人類基因組中，一般認(rèn)為，人類基因組平均每6～10Kb就有一個(gè)STR基因座，STR有高度多態(tài)性并遵循孟德爾共顯性遺傳，具有操作簡(jiǎn)便、分型準(zhǔn)確和豐富的多態(tài)信息量等特點(diǎn)，已成為第二代DNA分析技術(shù)的核心。本文應(yīng)用STR多態(tài)位點(diǎn)結(jié)合DNA定量分析，對(duì)唐氏綜合征患兒進(jìn)行快速基因診斷及發(fā)病機(jī)理分析，以期建立一種準(zhǔn)確、快速的基因診斷唐氏綜合征的方法，為產(chǎn)前基因

3、診斷、降低患兒出生率奠定基礎(chǔ)。 材料與方法:選擇唐氏綜合征關(guān)鍵區(qū)域(DSCR)內(nèi)部及其附近的短串聯(lián)重復(fù)序列D21S11、D21S1270、D2lS1437、D21S1435，采集22個(gè)核心家系的血樣，經(jīng)SDS-蛋白酶-酚-氯仿抽提法提取基因組DNA，制備6％變性聚丙烯酰胺凝膠，進(jìn)行高壓電泳，凝膠經(jīng)過固定、染色、顯色三步處理至帶型清晰，通過STR各基因座擴(kuò)增條帶，判讀各個(gè)體的基因型，Gene Tools分析軟件得出擴(kuò)增產(chǎn)物的相對(duì)比

4、值。 結(jié)果:1、不同個(gè)體在某一STR位點(diǎn)的DNA電泳量分析可出現(xiàn)下列4種情況之一：①、只出現(xiàn)一條DNA深帶，為一純合子；②、出現(xiàn)兩條DNA帶，比例接近1：1，為正常雜合子；③、出現(xiàn)兩條DNA帶，比例接近2：1，為唐氏綜合征患者；④、出現(xiàn)三條DNA帶，比例接近1：1：1，為唐氏綜合征患者。2、在22個(gè)已知的唐氏綜合征家系分析中，未發(fā)現(xiàn)這4個(gè)STR位點(diǎn)有突變基因出現(xiàn)，遺傳方式符合孟德爾常染色體共顯性遺傳規(guī)律。3、根據(jù)電泳結(jié)果，22個(gè)