融合型自殺基因Fcy--Fur-5-FC對人卵巢癌細(xì)胞殺傷作用的研究.pdf

1、目的：研究融合型自殺基因Fcy：：Fur在真核細(xì)胞中的表達(dá)情況，并建立其在人卵巢癌細(xì)胞中的穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株，研究融合型自殺基因Fcy：：Fur聯(lián)合5-氟胞嘧啶（5-FC）對人卵巢癌細(xì)胞株（SKOV3）的殺傷作用，為研究融合型自殺基因Fcy：：Fur在腫瘤的基因治療方面的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 方法：（1）應(yīng)用基因重組技術(shù)，將pORF-Fcy：：Fur.中的Fcy：：Fur目的基因亞克隆到熒光真核表達(dá)載體pEGFP-N1，以酶切和測序鑒定

2、重組質(zhì)粒的正確性。（2）應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)將該質(zhì)粒導(dǎo)入SKOV3細(xì)胞，并篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株，通過報(bào)告基因熒光蛋白的表達(dá)、RT-PCR和Western blot檢測其融合蛋白在真核細(xì)胞中的表達(dá)；（3）5-FC作用于穩(wěn)定表達(dá)融合型自殺基因Fcy：：Fur的SKOV3細(xì)胞株，以MTT法和FCM法檢測5-FC對Fcy：：Fur轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。 結(jié)果：（1）測序鑒定證明成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pEGFP-N1-Fcy：：Fur。（2