胃癌中microRNA-195靶基因的確定及與化療增敏、臨床預后相關性的研究.pdf

1、[目的]
　　在我國，胃癌的死亡率較高，大約每小時會有20人因患胃癌去世遠高于全球的平均水平[1]。早期胃癌不易被診斷，導致了胃癌的死亡率較高，同時在治療方面，進展期胃癌也尚未發(fā)現十分有效的治療手段。因此進一步探索胃癌的發(fā)生發(fā)展機制，通過實驗創(chuàng)建有理論基礎的、全新的診治途徑是十分必要的。
　　近些年來被發(fā)現的MicroRNA(miRNA)，也被稱為微小RNA，屬于非編碼RNA分子中全新的一種。就當前的研究觀點來看，Micro

2、RNA對腫瘤的發(fā)生以及發(fā)展產生調控作用是通過近于癌基因或抑癌基因等途徑進行的。研究者們的關注焦點正越來越集中在與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關的miRNA分子上。
　　本課題組在前期芯片分析篩選研究中發(fā)現在胃癌中有一個明顯下調的miR-195分子，既往研究顯示miRNA-195在肝癌、結直腸癌和非小細胞肺癌等腫瘤中發(fā)揮著非常重要的作用。提示miR-195很有可能通過調控靶基因來對腫瘤增殖通路進行抑制或對凋亡通路進行激活，進而影響胃癌患者的療效和

3、預后。
　　本課題擬從胃癌中miR-195和靶基因的確定、對胃癌細胞增殖凋亡等細胞表型的影響、與化療藥物的療效和臨床預后的相關性分析等四個方面去探討miR-195與胃癌的規(guī)律性關系;為胃癌預后分層和臨床治療尋找新的靶點提供理論依據。
　　[方法]
　　對轉染后microRNA-195表達不同的細胞進行RNA提取并逆轉錄，利用Real-time PCR方法進一步驗證胃癌中microRNA-195的表達情況;靶基因預測軟件

4、預測microRNA-195的靶基因，并通過雙熒光素及突變實驗、Western Blot以及Real-time PCR等方法進行驗證;對細胞進行轉染，通過流式細胞術對細胞凋亡作用進行分析，通過劃痕實驗及Transwell實驗對其侵襲及遷移作用做出分析;利用順鉑處理細胞，比較microRNA-195的不同表達對細胞增敏的影響;對29例患者的臨床資料進行統(tǒng)計，分析microRNA-195表達改變對患者腫瘤的TNM分期、Borrmann分型、

5、血管侵襲以及生存期的影響。
　　[結果]
　　明確驗證了microRNA-195在胃癌中的表達呈現明顯下調趨勢;確認了Akt3是microRNA-195的靶基因，在microRNA-195過表達的細胞中表達明顯降低;細胞實驗表明，轉染后microRNA-195過表達的細胞的侵襲能力顯著下降，早期凋亡增加;microRNA-195的高表達對順鉑化療療效具有明顯增敏作用;PFS與OS在microRNA-195上調患者中明顯延長，