腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞表型在癲癇發(fā)生過程中的作用研究.pdf

1、第一部分、癲癇發(fā)生過程中腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞表型的動態(tài)變化
　　目的：探索小鼠在癲癇發(fā)生過程中的不同時期腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞表型以及表型相關(guān)細(xì)胞因子的動態(tài)變化。
　　方法：選用7-8周齡C57BL/6J小鼠，分為正常對照組和實驗組。實驗組采用匹魯卡品腹腔注射誘導(dǎo)驚厥持續(xù)狀態(tài)（Status epilepticus,SE），同時進行腦電監(jiān)測對模型進行驗證。采用FCM對 SE后不同時期小膠質(zhì)細(xì)胞表型的變化進行動態(tài)監(jiān)測；酶聯(lián)免疫標(biāo)記分析(Enz

2、yme-linked immunosorbent assay, ELISA)監(jiān)測SE后不同表型小膠質(zhì)細(xì)胞所分泌的相關(guān)細(xì)胞因子白介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）、白介素-4(Interleukin-4,IL-4)、白介素-10(Interleukin-10,IL-10)的變化情況。
　　結(jié)果：
　　(1)匹魯卡品能夠誘發(fā)C57BL/6J小鼠出現(xiàn)驚厥表現(xiàn)，并且SE后腦電圖改變符合癲癇發(fā)生過程中的各時期腦電圖

3、變化。
　　(2)小鼠腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞表型比例在SE后癲癇發(fā)生的過程中動態(tài)變化，M1型小膠質(zhì)細(xì)胞比例在 SE后迅速升高，并維持在較高水平，直至SE后20天左右開始逐漸下降，隨后降至接近對照水平；M2型小膠質(zhì)細(xì)胞比例在SE后迅速下降，隨后逐漸升高，在SE后第20天左右達(dá)到高峰，并于SE后第28天將至接近對照水平。
　　(3)腦內(nèi)M1型小膠質(zhì)細(xì)胞分泌的典型細(xì)胞因子IL-1β的水平的波動趨勢與M1型小膠質(zhì)細(xì)胞比例的變化趨勢基本一致；

4、M2型小膠質(zhì)細(xì)胞分泌的典型細(xì)胞因子IL-4、IL-10的水平與M2型小膠質(zhì)細(xì)胞比例的變化趨勢基本一致。
　　結(jié)論：SE后癲癇發(fā)生過程中小膠質(zhì)細(xì)胞的不同表型所占比例動態(tài)變化，表型相關(guān)細(xì)胞因子的水平與表型變化趨勢基本一致，說明小膠質(zhì)細(xì)胞的表型變化參與了癲癇發(fā)生過程。
　　第二部分、腹腔注射IFN-γ/IL-4調(diào)節(jié)腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞表型及相應(yīng)細(xì)胞因子
　　目的：探索能否通過腹腔注射Th1細(xì)胞因子（IFN-γ）或Th2細(xì)胞因子（I

5、L-4）調(diào)控腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞的表型方法：根據(jù)第一部分結(jié)果，在M1比例顯著升高的早期分別給予IFN-γ和IL-4以達(dá)到進一步促進M1比例升高和抑制M1比例升高的作用，在M2比例顯著升高的中期分別給予IFN-γ和IL-4以抑制M2的產(chǎn)生和進一步促進M2比例升高。選用7-8周齡C57BL/6J小鼠，采用匹魯卡品腹腔注射誘導(dǎo)驚厥持續(xù)狀態(tài)，隨機分成6組：早期生理鹽水干預(yù)組、早期IFN-γ干預(yù)組、早期IL-4干預(yù)組、中期生理鹽水干預(yù)組、中期IFN-γ

6、干預(yù)組、中期IL-4干預(yù)組。應(yīng)用FCM檢測干預(yù)后小膠質(zhì)細(xì)胞的表型變化，進一步應(yīng)用ELISA檢測細(xì)胞因子IL-1β、IL-4、IL-10的水平，了解干預(yù)后不同小膠質(zhì)細(xì)胞表型是否發(fā)生了變化，及表型相關(guān)細(xì)胞因子水平的變化是否與表型一致。
　　結(jié)果：
　　（1）腹腔注射細(xì)胞因子能夠達(dá)到增加外周血及腦組織細(xì)胞因子濃度的作用。
　?。?）早期補充IFN-γ不能進一步增加SE后M1的比例。中期補充IL-4也無法進一步增加M2的比例。

7、SE后表型相關(guān)細(xì)胞因子在SE后第15天達(dá)到峰值，而早期IFN-γ組、中期IL-4組腦內(nèi)IL-1β、IL-4、IL-10的峰值水平與生理鹽水干預(yù)組無顯著性差異。
　　（3）早期給予IL-4可以顯著抑制SE后早期M1的持續(xù)升高。同樣的，中期給予IFN-γ抑制了M2的升高。在SE后第15天，早期IL-4組及中期IFN-γ組腦內(nèi)IL-1β、IL-4、IL-10的峰值水平較生理鹽水干預(yù)組明顯降低。
　?。?）抑制表型發(fā)生偏移并不是通過

8、抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化實現(xiàn)的。
　　結(jié)論：進一步增加SE后小膠質(zhì)細(xì)胞表型偏移程度的干預(yù)措施不能到達(dá)預(yù)期效果，而抑制SE后小膠質(zhì)細(xì)胞表型偏移的干預(yù)措施均成功抑制了表型的偏移。
　　第三部分、抑制SE后小膠質(zhì)細(xì)胞表型偏移對癲癇發(fā)生及認(rèn)知功能損傷的作用
　　目的：探索在SE后通過抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的表型的偏移能否影響癲癇的發(fā)生及腦認(rèn)知功能損傷。
　　方法：在SE后第50天對實驗組（生理鹽水干預(yù)組、早期IL-4干預(yù)組、中期IFN

9、-γ干預(yù)組）及對照組（正常對照組、IFN-γ對照組、IL-4對照組）的小鼠植入顱內(nèi)電極，利用腦電連續(xù)檢測14天，觀察自發(fā)性癲癇發(fā)作（Spontaneous recurrent seizures,SRS）情況。應(yīng)用Morris水迷宮檢測干預(yù)后小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力來反應(yīng)認(rèn)知功能的變化。
　　結(jié)果：在腦電檢測過程中，對照組（正常對照組、IFN-γ對照組、IL-4對照組）未出現(xiàn)驚厥發(fā)作。早期IL-4干預(yù)組、中期IFN-γ干預(yù)組的SRS發(fā)