DNA甲基化在DEHP誘發(fā)隱睪發(fā)生過程中的調(diào)控作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：研究環(huán)境內(nèi)分泌干擾物鄰苯二甲酸二（2-乙已基）酯（Di-（2-ethylhexyl）phthalate，DEHP）作用于孕鼠后，通過分析胎鼠基因組DNA甲基化水平和胰島素樣因子3（INSL3）基因CpG島甲基化狀態(tài)，并檢測INSL3和三種DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)，探討DNA甲基化在DEHP誘發(fā)小鼠隱睪過程中的作用，以期初步揭示DEHP導(dǎo)致隱睪發(fā)生的表觀遺傳調(diào)控機(jī)制。
　　 方法：妊娠昆明小鼠（KM mice）隨機(jī)分為3組，

2、每組20只：正常對照組、玉米油對照組和DEHP實(shí)驗(yàn)組。玉米油對照組和DEHP實(shí)驗(yàn)組自妊娠12.5d到妊娠18.5d分別持續(xù)經(jīng)口予以玉米油和DEHP[500mg/（kg·d）]，正常對照組不予灌藥。高效液相色譜法（High PerformanceLiquid Chromatography，HPLC）和甲基化敏感擴(kuò)增多態(tài)性技術(shù)（Methylation-sensitive amplification polymorphism techniqu

3、e，MSAP）檢測基因組DNA整體甲基化水平；重亞硫酸鹽修飾后甲基化特異性PCR（Methylation specific PCR，MSP）技術(shù)分析INSL3基因CpG島甲基化狀態(tài)；同時(shí)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測INSL3和三種DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)。
　　 結(jié)果：DEHP實(shí)驗(yàn)組基因組DNA甲基化程度明顯增高，其甲基化水平為34.03％±3.05％；而正常對照組和玉米油對照組小鼠睪丸組織基因組DNA甲基化程度分別為28.37％±2

4、.37％和28.58％±2.45％。DEHP實(shí)驗(yàn)組INSL3基因第一外顯子區(qū)CpG島存在異常甲基化，其mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)量分別為對照組的1/3和1/4。三種甲基化轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)在DEHP實(shí)驗(yàn)組均有不同程度的增高，與對照組相比其差異具有顯著性（Dnmt1，P<0.05；Dnmt3a，P<0.01；Dnmt3b，P<0.05）。
　　 結(jié)論：環(huán)境內(nèi)分泌干擾物DEHP通過影響三種甲基化轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)而導(dǎo)致基因組DNA甲基化水平升高和I