NK細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞在肺鱗癌組織中的浸潤(rùn)與預(yù)后的研究.pdf

1、背景與目的：自然殺傷(naturalkillerCell,NK)細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞(dendriticcells,DCs)在抗腫瘤免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，NK細(xì)胞在體內(nèi)無須抗原預(yù)先致敏即能殺傷腫瘤細(xì)胞，DCs是目前發(fā)現(xiàn)的體內(nèi)最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞(antigen-presentingcells,APC)，能夠引發(fā)一系列抗腫瘤免疫應(yīng)答。NK細(xì)胞和DCs可能影響腫瘤患者的預(yù)后，隨著腫瘤免疫研究的深入，NK細(xì)胞和DCs在抗腫瘤中的地位越來越受到重視

2、，兩者在肺鱗癌組織中的浸潤(rùn)對(duì)患者預(yù)后的影響仍不清楚。本研究通過檢測(cè)肺鱗癌組織中NK細(xì)胞和DCs浸潤(rùn)的密度、分布狀況等指標(biāo)，并對(duì)患者淋巴轉(zhuǎn)移、術(shù)后生存時(shí)間等臨床病理指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)研究，旨在探討肺鱗癌組織中浸潤(rùn)NK細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞的密度與預(yù)后的關(guān)系。 材料與方法：全部病例來源于1998年1月至2001年9月間山東省平邑縣人民醫(yī)院胸外科手術(shù)切除的肺鱗癌患者，對(duì)影像檢查等相關(guān)臨床資料完整、術(shù)前無放療、化療史者進(jìn)行隨訪，獲取術(shù)后生存時(shí)間及死

3、因等。下述情況應(yīng)排除在外：1)手術(shù)切除后30天內(nèi)死亡，2)死于與肺鱗狀細(xì)胞癌無關(guān)的原因，3)肺鱗癌術(shù)前2周內(nèi)有呼吸道感染病史。符合上述條件的病人共47例。其中男36例，女11例。年齡在49～75之間，平均62.6歲。根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)1997年的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，其中Ⅰ期11例，Ⅱ期21例，Ⅲ期15例。有淋巴轉(zhuǎn)移36例，無淋巴節(jié)轉(zhuǎn)移11例。根據(jù)腫瘤侵潤(rùn)深度分為T1期6例，T2期30例，T3期11例。其中肺葉切除術(shù)41例，左側(cè)全肺

4、切除術(shù)6例。其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移11例。術(shù)后生存時(shí)間8月～5年以上。根據(jù)術(shù)后生存期的差異，將本組病例分為短期生存組(術(shù)后生存期＜36月)20例，長(zhǎng)期生存組27例(術(shù)后生存期≥36月)。 采用SP法，將全組病例癌組織蠟塊進(jìn)行切片，厚度4μm，NK細(xì)胞用CD57抗體標(biāo)記、DCs用S-100蛋白標(biāo)記進(jìn)行免疫組化染色，所有操作步驟均按試劑盒說明進(jìn)行。由病理科醫(yī)生雙盲閱片，對(duì)每張切片隨機(jī)計(jì)數(shù)10個(gè)含有陽性細(xì)胞的高倍視野(×

5、400)，分別計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)，取其平均值。 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。對(duì)長(zhǎng)期生存組、短期生存組之間每高倍視野NK細(xì)胞、DCs均數(shù)的比較，以及各病理參數(shù)分組的細(xì)胞均數(shù)的比較采用t檢驗(yàn)，生存率的計(jì)算和生存曲線的繪制采用Kaplan-Meier方法，以Logrank檢驗(yàn)比較兩組生存差異的顯著性。 結(jié)果： 1長(zhǎng)期生存組與短期生存組之間NK細(xì)胞、DCs每高倍視野細(xì)胞均數(shù)的比較免疫組化染色結(jié)果顯示C

6、D57陽性的NK細(xì)胞染色主要定位于胞膜和胞核，呈棕黃色，與其他浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞一起分布在癌巢周圍及腫瘤的間質(zhì)中。孤立的NK細(xì)胞，有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)在距離腫瘤細(xì)胞很近的地方。在本組47例肺鱗癌組織中，CD57陽性的NK細(xì)胞每高倍野細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)為0.4～46.3/HPF，平均17.2±13.9/HPF。長(zhǎng)期生存組中NK細(xì)胞浸潤(rùn)平均數(shù)為23.3±12.2/HPF，明顯高于短期生存組平均數(shù)9.0±11.9/HPF，P＜0.05。S-100陽性的DCs，細(xì)

7、胞漿和細(xì)胞核均有陽性著色，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，胞漿可見長(zhǎng)短不一、數(shù)目不等的樹突狀突起。在肺鱗癌組織中，S-100陽性的DCs多數(shù)呈區(qū)域性分布在間質(zhì)和癌巢周圍，常和淋巴細(xì)胞相伴浸潤(rùn)。47例肺鱗癌組織中，每高倍視野浸潤(rùn)的DCs數(shù)為1.2～17.8，平均為5.6±3.5。長(zhǎng)期生存組和短期生存組DCs浸潤(rùn)數(shù)分別為7.6±3.3/HPF和2.9±1.2/HPF，兩組差異有顯著性，P＜0.05。 2肺鱗癌組織中NK細(xì)胞和DCs的浸潤(rùn)與臨床病理特

8、征的關(guān)系 NK細(xì)胞與DCs在肺鱗癌組織中的浸潤(rùn)與患者的年齡及性別等因素?zé)o關(guān)。但是兩者均與患者的臨床分期、腫瘤的侵潤(rùn)程度及淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移等因素有關(guān)。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的NK細(xì)胞與DCs浸潤(rùn)數(shù)明顯高于有淋巴節(jié)轉(zhuǎn)移組，兩組差異有顯著性(P＜0.05)，NK細(xì)胞與DCs在Ⅰ期肺鱗癌組織中的細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)高于Ⅱ、Ⅲ期中的細(xì)胞數(shù)，兩者差異有顯著性(P＜0.05)，但它們?cè)冖颉ⅱ笃谥械募?xì)胞數(shù)雖然有差別，但兩者差異無顯著性(P＞0.05)。與上述結(jié)果類

9、似，NK細(xì)胞與DCs浸潤(rùn)結(jié)果在T1期中的數(shù)量高于T2及T3組，差異有顯著性，隨著腫瘤侵潤(rùn)程度的加深，兩者的浸潤(rùn)數(shù)量逐漸減少，但在T2及T3組之間差異無顯著性(P＞0.05)。 3肺鱗癌組織中NK細(xì)胞和DC的浸潤(rùn)與患者預(yù)后的關(guān)系 將每高倍視野下浸潤(rùn)的NK細(xì)胞數(shù)分為高低浸潤(rùn)兩組，NK細(xì)胞浸潤(rùn)≥25個(gè)/HPF為高浸潤(rùn)組，共13例；將NK細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)＜25個(gè)/HPF為低浸潤(rùn)組共34例。同樣將DCs浸潤(rùn)也分為高低浸潤(rùn)兩組，DCs浸潤(rùn)

10、≥6/HPF為高浸潤(rùn)組，共19例；DCs浸潤(rùn)＜6/HPF為低浸潤(rùn)組，共28例。高浸潤(rùn)的NKC和DCs組中，術(shù)后平均生存分別為45.3月和50.5月，顯著高于低浸潤(rùn)的NKC和DC，分別為31.9和25.6月(P＜0.05，P＜0.01)。進(jìn)一步比較NK細(xì)胞及DCs與術(shù)后生存時(shí)間的關(guān)系，將本組病人依據(jù)NK細(xì)胞及DCs的浸潤(rùn)情況的不同分為如下4組：NK細(xì)胞和DCs均為高浸潤(rùn)的HH組，NK細(xì)胞及DCs分別為高、低浸潤(rùn)的HL組，NK細(xì)胞及DCs分

11、別為低、高浸潤(rùn)的LH組，NK細(xì)胞及DCs分別為低、低浸潤(rùn)的LL組。其中HH組9例(50.7±10.7)，HL組4例(33.0±15.7)，LH組10例(50.2±8.3)，LL組24例(24.3±13.4)。對(duì)上述4組結(jié)果比較，發(fā)現(xiàn)LL組術(shù)后生存時(shí)間顯著短于上述3組，P＜0.05。將TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病人年齡、性別及NK細(xì)胞和DCs的浸潤(rùn)納入Cox多因素風(fēng)險(xiǎn)比例模型，發(fā)現(xiàn)TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為影響預(yù)后的獨(dú)立因素，NK細(xì)胞和DCs