人源基因載體對(duì)杜氏肌營養(yǎng)不良和血友病B基因治療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、　　本文的研究內(nèi)容包括兩部分： 第一部分：人源載體介導(dǎo)的微小肌營養(yǎng)不良蛋白治療DMD的研究。首先以肌肉組織cDNA為模版用PCR的方法擴(kuò)增了dystrophin的部分序列構(gòu)建成minidystrophin基因，與EGFP基因融合后連入核糖體靶向性載體pHrneo，將得到的pHrnDysG載體轉(zhuǎn)入Cos-7細(xì)胞觀察其表達(dá)，然后再將載體轉(zhuǎn)入DMD患者的成肌細(xì)胞中觀察其表達(dá)情況。所構(gòu)建的pHrnDysG載體轉(zhuǎn)入Cos-7細(xì)胞后觀察到綠

2、色熒光可以定位于細(xì)胞膜上，將DMD患者的肌肉組織原代培養(yǎng)后得到了成肌細(xì)胞，pHrnDysG載體轉(zhuǎn)入成肌細(xì)胞后可見熒光表達(dá)?！　〉诙糠郑喝嗽摧d體介導(dǎo)的凝血因子Ⅸ在肝細(xì)胞中的表達(dá)的研究。將已構(gòu)建的pHrnF9載體利用電轉(zhuǎn)染的方法導(dǎo)入人肝細(xì)胞系HL-7702，經(jīng)G418篩選，鑒定出定點(diǎn)整合克隆，用RT-PCR、ELISA檢測(cè)凝血因子Ⅸ的表達(dá)。在1.5×106細(xì)胞中找到了一個(gè)定點(diǎn)整合克隆，ELISA檢測(cè)FIX表達(dá)量為106ng/106細(xì)胞/