楊月紅_進行性肌營養(yǎng)不良癥（dmd）基因檢測

1、醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實驗,進行性肌營養(yǎng)不良癥（DMD）基因檢測,第三次 實驗內(nèi)容,,,實驗?zāi)康模?通過對進行性肌營養(yǎng)不良癥基因檢的實驗，掌握一種簡便檢測基因缺失突變的方法,實驗原理：通過聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR），結(jié)合瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)，檢測進行性肌營養(yǎng)不良癥(Duchenne muscular dystrophy，DMD)致病基因外顯子缺失突變。,瓊脂糖凝膠電泳技術(shù),,DMD是一組

2、原發(fā)于肌肉組織的遺傳病。DMD基因定位于Xq21.2-21.3之間，全長2450 kb左右，是人體最大的基因，大約占X染色體的1%。有79個外顯子組成，編碼1個3685個氨基酸、分子量為427 kD的蛋白質(zhì)-----抗肌營養(yǎng)不良蛋白(dystrophin)，這種蛋白具有穩(wěn)定細胞膜和細胞內(nèi)鈣調(diào)節(jié)的功能。,該基因有多種突變形式，60％是外顯子缺失突變，5％是重復(fù)突變，另35％可能是很小的DNA片段缺失或點突變。通常選擇DMD基因中9個缺失熱

3、點的外顯子擴增，可檢出缺失突變中的90%。,,DMD基因4個外顯子的引物序列,本實驗設(shè)計為擴增DMD基因中4個外顯子，其中外顯子45 和48在中國患者中的檢出率分別為26%和48%。,實驗步驟：,采血,,DNA抽提,PCR,電泳,觀察結(jié)果,,,,實驗方法：多重PCR,雙蒸水 17.8 ?l 10xBuffer 2.5 ?l MgCl2

4、 2 ?l dNTPs 0.5 ?l Primer R+F (混合) 1.4 ?l DNA 模板 0.5 ?l Taq-DNA聚合酶 0.3 ?l 石蠟油 1滴,

5、,,10?l PCR產(chǎn)物,,,,,混勻,加樣,,,電泳(140V,2hr),,紫外燈下觀察,2 ?l 6*loading buffer,實驗結(jié)果與分析,2. 人類染色體核型分析,●實驗?zāi)康模和ㄟ^實驗掌握染色體核型分析的常用方法以及Ｇ分帶的帶型特征，初步會識別Ｇ分帶人類染色體。,,核型 : 將一個細胞內(nèi)的染色體按照一定的順序排列起來構(gòu)成的圖象,實驗原理,實驗原理 ：,人類染色體Ｇ帶,,,1P33,1q32,人類染色體Ｇ帶,,,,,,,

6、,,49,xxxxx,,,,,,,,1 2 3 4 5 —————— A —————— —— B —— 6 7 8 9 10 11 1

7、2 ———————————— C ————————————— 13 14 15 16 17 18 19 20 ——— D ——— ——— E ———— —— F —— 21 22 — G — 性染色體,作 業(yè),核型：46，XY,