B型血友病FIX基因突變與發(fā)病機(jī)制研究.pdf

1、研究目的:對(duì)3例遺傳性凝血因子Ⅸ缺陷癥的患者進(jìn)行了臨床調(diào)查及家系系譜分析,并在分子水平上分析HB基因缺陷及其類型,研究疾病本質(zhì)及其發(fā)病機(jī)制,加深對(duì)HB的認(rèn)識(shí)。
　　方法:采用活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶原時(shí)間(PT)、凝血酶時(shí)間(TT)、纖維蛋白原(Fg)、凝血因子FⅨ活性(FⅨ:C)、凝血因子FⅧ活性(FⅧ:C)等測(cè)定進(jìn)行HB表型診斷;采集HB患者家系先證者及家系其他成員的外周靜脈血,提取基因組DNA;根據(jù)NCBI上

2、GenBank中的FⅨ基因參考序列,利用PrimerPremier5軟件設(shè)計(jì)9對(duì)引物,采用PCR法對(duì)先證者及可疑攜帶者FⅨ基因外顯子及側(cè)翼序列進(jìn)行擴(kuò)增,運(yùn)用雙脫氧鏈終止法在ABI3730XL測(cè)序儀上對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序,結(jié)合Chromas2軟件及BLAST將測(cè)序結(jié)果與GenBank中參考序列進(jìn)行比對(duì),尋找基因突變;用長(zhǎng)鏈聚合酶鏈反應(yīng)(LD-PCR)及瓊脂糖凝膠電泳對(duì)F9基因大片段缺失進(jìn)行檢測(cè)。
　　結(jié)果:通過(guò)PCR及基因測(cè)序,在3

3、例血友病患者FⅨ基因中,其中2例發(fā)現(xiàn)錯(cuò)義突變:患者1為國(guó)際上相對(duì)罕見(jiàn)的一例女性純合血友病患者,其6號(hào)外顯子發(fā)現(xiàn)g.25377C>T(p.Arg191Cys)純合點(diǎn)突變;家系1先證者為男性患者,其4號(hào)外顯子發(fā)現(xiàn)g.15437G>A(p.Gly125Glu)點(diǎn)突變;家系2先證者同樣也是男性患者,在其基因中發(fā)現(xiàn)包含4、5號(hào)外顯子及4號(hào)內(nèi)含子的11214bp的大片段缺失,為新發(fā)現(xiàn)的變異,在國(guó)際上首次報(bào)道,并通過(guò)分段PCR及測(cè)序發(fā)現(xiàn)了該缺失的在基