植入前小鼠胚胎對輸卵管上皮細(xì)胞DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1表達的影響.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文植入前小鼠胚胎對輸卵管上皮細(xì)胞DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1表達的影響姓名：黃瓊曉申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)（生殖內(nèi)分泌）指導(dǎo)教師：金帆黃荷鳳200505012005年浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文集化S腺苷蛋氨酸的甲基轉(zhuǎn)移至新生DNA鏈CpG胞嘧啶的5碳位上，對半甲基化的底物表現(xiàn)出較高的催化活性，主要起著維持體細(xì)胞基因組DNA甲基化水平穩(wěn)定的作用，但也參與新發(fā)甲基化過程。其水平可以間接反映基因組DNA甲基化模式。到目前為止，尚沒有

2、證據(jù)表明植入前胚胎發(fā)育和母體輸卵管上皮DNA甲基化水平相關(guān)。研究目的本實驗以小鼠為研究對象，建立假孕小鼠模型，通過比較妊娠小鼠和假孕小鼠在胚胎植入前期輸卵管上皮細(xì)胞DnmtlmRNA和蛋白表達的變化，來探討小鼠植入前期胚胎對輸卵管上皮細(xì)胞基因調(diào)節(jié)的可能途徑，從而更深入地理解胚胎／母體交流的部分機制。研究對象與方法雌性健康生育期未孕ICR小鼠80只和同一品系的雄性小鼠40只，隨機分為兩組(A組和B組)，每組包括40只雌性小鼠和20只雄性小

3、鼠。首先對B組的20只雄鼠行輸精管結(jié)扎術(shù)，然后對兩組雌鼠均行超促排卵，間隔46—48h腹腔注射PMSG7，5IU／只和hCG75Iu／只，hCG注射當(dāng)日以2：l與同組雄鼠合籠，次晨檢查陰栓，有栓者做標(biāo)記(A組有栓者記為妊娠組，B組有栓者記為假孕組，兩組均含30只雌性小鼠)。將妊娠組和假孕組小鼠在相當(dāng)于胚胎2細(xì)胞期，4細(xì)胞期，8細(xì)胞期的時間分別脫頸椎處死。取出輸卵管。應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法確定DnmtI蛋白在小鼠輸卵管的組織學(xué)定位；選取植入

4、前胚胎的2細(xì)胞期、4細(xì)胞期和8細(xì)胞期作為3個觀察點，采用realtimeRTPCR和western—blot分別檢測正常妊娠和假孕小鼠輸卵管上皮DnmtlmRNA和蛋白表達水平的變化，并進行相對定量分析。結(jié)果1免疫組織化學(xué)：Dnmtl表達定位于小鼠輸卵管的上皮細(xì)胞層，籍此說明本實驗結(jié)果反映的主要是輸卵管上皮層的Dnmtl表達變化：2RealtimeRTPCR對DnmtlmRNA的半定量分析：(1)妊娠組小鼠各細(xì)胞期之間DnmtlmRNA