漢防己甲素對HL-60細胞DNA甲基轉(zhuǎn)移酶表達的影響.pdf

1、目的:
　　漢防己甲素（tetrandrine,Tet)是一種多作用點的抗癌癥傳統(tǒng)藥物，能經(jīng)由多種作用機理實行抗癌癥效應(yīng)。地西他濱(DAC)是一種被FDA批準(zhǔn)的特異性的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNA methyltransferase，DNMT）抑制劑，已在治療MDS、MDS轉(zhuǎn)AML、老年AML等血液惡性疾病中發(fā)揮出較好的療效。本課題擬研究Tet單用及與DAC聯(lián)合應(yīng)用對HL-60細胞DNMT表達的影響，研究漢防己甲素是否能夠抑制DNMT

2、及其抑制程度，給漢防己甲素的應(yīng)用提出新的抗癌癥可能機理。
　　方法:
　　1.MTT（四甲基偶氮唑藍）法檢測Tet單藥、DAC單藥、Tet與DAC聯(lián)合用藥后對HL-60細胞的生長抑制作用；
　　2.流式細胞術(shù)檢測Tet、DAC單藥及聯(lián)合用藥后HL-60細胞的早期凋亡率；
　　3.實時熒光定量PCR檢測Tet、DAC單藥及聯(lián)合用藥后HL-60細胞DNMT1、DNMT3B基因的表達量；
　　4.蛋白質(zhì)免疫印跡法

3、檢測Tet、DAC單藥及聯(lián)合用藥后HL-60細胞DNMT1、DNMT3B蛋白的表達量。
　　結(jié)果:
　　1.MTT檢測HL-60細胞生長抑制結(jié)果顯示：隨著Tet、DAC藥物濃度的增加，Tet、DAC對HL-60細胞的生長抑制作用越來越明顯，相比于空白對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，隨著Tet、DAC藥物作用時間的增加（0小時、24小時、48小時），Tet、DAC對HL-60細胞的生長抑制作用越來越明顯，相比于空白對照組，差異有統(tǒng)計

4、學(xué)意義，說明Tet、DAC對HL-60細胞生長抑制作用呈明顯的時間-劑量依賴關(guān)系；且2umol/L Tet與4umol/L DAC聯(lián)合作用于HL-60細胞后，增殖抑制率均明顯大于2umol/L Tet及4umol/L DAC單藥組，抑制作用更強（F=152.956，P=0.005）。
　　2.流式細胞術(shù)測定HL-60的早凋率結(jié)果：2umol/L Tet作用于HL-60細胞的平均早期凋亡率為（9.2±0.16）％，4umol/L T

5、et作用于HL-60細胞的平均早期凋亡率為（12.3±0.20）%,說明Tet導(dǎo)致HL-60細胞凋亡有劑量依賴性,相比于空白對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；2umol/L Tet與4umol/L DAC聯(lián)合用藥后平均早期凋亡率為（17.6±0.87）%，即聯(lián)合Tet與DAC后的促HL-60細胞早期凋亡效果更強（P<0.05）。
　　3.實時熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示：經(jīng)Tet2 umol/L、4umol/L，DAC4 umol/L處理H

6、L-60細胞四十八小時后，細胞中DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1、DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3B的mRNA表達水平明顯下調(diào)，相比于空白對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Tet組F=21676.000，P=0.02），2 umol/L Tet與4 umol/L DAC聯(lián)合用藥組下降幅度明顯大于2umol/L Tet及4umol/L DAC單藥組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.01）。
　　4.蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測結(jié)果示：與對照組相比，2 umol/L Tet和4 um