腺病毒介導(dǎo)的IL-24基因轉(zhuǎn)移對LPS誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞增生的抑制作用.pdf

1、[目的] ①觀察腺病毒介導(dǎo)的IL-24基因轉(zhuǎn)移對LPS誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞增生的影響，并探索其對系膜細(xì)胞LPS誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞的細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白p21、p27和CyclinE的影響； ②探討腺病毒介導(dǎo)的IL-24基因轉(zhuǎn)移對系膜細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響。 [方法] ①IL-24腺病毒載體構(gòu)建及擴增通過RT-PCR方法構(gòu)建IL-24腺病毒載體，并經(jīng)序列分析證實。腺病毒載體在293細(xì)胞中擴增。 ②腎小球系膜細(xì)胞培

2、養(yǎng)、分組及腺病毒感染系膜細(xì)胞在5％FCS/DMEM中培染Ad.IL-24；LPS組：在5％FCS/DMEM中加LPS(10mg/L)，感染Ad.GFP；LPS+IL-24組：在5％FCS/DMEM加LPS(10mg/L)，感染Ad.IL-24。培養(yǎng)后分別取24小時、48小時提取細(xì)胞樣本或培養(yǎng)上清。 ③RT-PCR和ELISA方法檢測IL-24在GMC中的表達，ELISA方法檢測IL-1、IL-6的表達。 ④用MTT法和流

3、式細(xì)胞術(shù)檢測GMC增生。 ⑤用western-blot檢測p21、p27及CyclinE的表達。 ⑥用AnnexinV/FITC流式細(xì)胞術(shù)檢測GMC凋亡。 [結(jié)果] ①對照組系膜細(xì)胞無IL-24表達，Ad.IL-24感染GMC后4小時到48小時IL-24有穩(wěn)定表達。 ②IL-24無誘導(dǎo)系膜細(xì)胞增生活性，而LPS可明顯誘導(dǎo)GMC增生,IL-24則可明顯抑制LPS誘導(dǎo)的GMC增生，但仍高于對照組。

4、 ③LPS干預(yù)后的系膜細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白p21、p27表達下調(diào),CyclinE表達上調(diào)；轉(zhuǎn)染IL-24的系膜細(xì)胞p21、p27表達上調(diào)而CyclinE表達下調(diào)。 ④IL-24基因轉(zhuǎn)移上調(diào)系膜細(xì)胞IL-6分泌，而對系膜細(xì)胞分泌TNF-α無明顯影響。 [結(jié)論] ①IL-24基因轉(zhuǎn)移可使LPS誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞增殖受到抑制。 ②外源性IL-24基因可誘導(dǎo)系膜細(xì)胞凋亡，使細(xì)胞周期負(fù)調(diào)控蛋白p21、p27表達上調(diào)的同