乳腺癌DNA損傷修復(fù)通路中脫泛素金屬蛋白酶BRCC36及相關(guān)蛋白的基因克隆、表達(dá)純化及性質(zhì)研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要....................................................................................................……4ABSTRACT。.。.。。.……。..................……。..…，.............……，........……。..……。..…5第一章緒論.....................

2、.................................................................……6第一節(jié)人乳腺癌脫泛素金屬蛋白酶BRCC36簡(jiǎn)介............................................……，................……，7一泛素(Ubiquitin)蛋白酶體(Proteasome)系統(tǒng)介紹............................

3、............................……7二脫泛素化(Deubiquitin)簡(jiǎn)介.................……，......................................……、................……，…日第二節(jié)乳腺癌易感基因BRCAI簡(jiǎn)介......................................................................

4、....……17一brcaj基因的定位及結(jié)構(gòu)...............................................................................................……17二BRCAI蛋白的功能........................................................................................

5、..................……19第三節(jié)腫瘤抑制蛋白P53簡(jiǎn)介...............................................................................................……24一p”基因和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu).....................................……，..................................

6、.......................……25二P53的翻譯后修飾.......................................................................……，.............................……28三P53調(diào)控的細(xì)胞功能...........................................……，...................

7、..........................……，，.……犯第二章脫泛素金屬蛋白酶BRCC36的基因構(gòu)建、蛋白表達(dá)純化與性質(zhì)研究................................................................................................……40一勺J八曰4一、︸一實(shí)驗(yàn)材料二實(shí)驗(yàn)方法三實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論第三章乳腺癌易感基因BRCA1502一105、的基

8、因構(gòu)建，蛋白表達(dá)、純化與鑒定....................................................................................................……57﹁廠n口4︸、曰zn乙n實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)方法二實(shí)驗(yàn)結(jié)果與詞‘論第四章腫瘤抑制因子P53的基因構(gòu)建，蛋白表達(dá)、純化與性質(zhì)研究....................................……。....

9、.............................................................……68一實(shí)驗(yàn)材料一，…‘..…一實(shí)驗(yàn)方法.....……二實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討淪.…，......................……，…，.......……68...........................................……71...................................

10、.……，...……75復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅著女性健康。世界每年約有一百萬(wàn)婦女患有乳腺癌。世界上我國(guó)雖屬女性乳腺癌的低發(fā)國(guó)，但近年來(lái)乳腺癌的發(fā)病率明顯增高，居女性惡性腫瘤中的第二位。乳腺癌發(fā)病原因復(fù)雜，既有遺傳因素的影響，又受環(huán)境、生活習(xí)慣的影響，其中遺傳因素在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中起主要作用。不同類型的乳腺癌發(fā)病機(jī)制和治療方法也不盡相同。目前，已經(jīng)證實(shí)的乳腺癌易感基因主要包括不BRCAI、BRCA

11、Z、P53、CHEKZ、ATM、NBSIB側(cè)PI和PALBZ等，其中BRCAI和BRCAZ是兩個(gè)最重要的乳腺癌易感基因，約有40%的家族性乳腺癌與BRCAI和BRCAZ的突變有關(guān)。BRCAI和BRCAZ蛋白參與許多細(xì)胞生理過程，包括DNA修復(fù)和細(xì)胞周期檢驗(yàn)點(diǎn)控制。BRCAI和BRCAZ與其他蛋白質(zhì)結(jié)合形成一種叫BRCC的復(fù)合物，它調(diào)節(jié)DNA的修復(fù)。研究發(fā)現(xiàn)BRCC復(fù)合物中有兩種新的蛋白質(zhì)，其中一種脫泛素金屬蛋白酶BRCC36與散發(fā)性乳腺

12、癌相關(guān)。基因敲除brcc3石，并不影響乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，但是當(dāng)將細(xì)胞暴露在離子輻射(IR)條件下時(shí)，將會(huì)導(dǎo)致凋亡的乳腺癌細(xì)胞數(shù)量增加。brcc了石的敲除，阻斷了由離子輻射(IR)誘導(dǎo)的BRCAI的磷酸化，從而阻斷了DNA的修復(fù)。磷酸化的BRCAI蛋白結(jié)合其他亞基組成BRCC復(fù)合物，才具有DNA修復(fù)功能。研究者發(fā)現(xiàn)BRCC蛋白復(fù)合物作為一種調(diào)節(jié)酶產(chǎn)生作用。BRCC其中的一個(gè)靶蛋白是P53蛋白，當(dāng)其發(fā)生突變不受調(diào)控時(shí)就成為癌癥潛在性的啟動(dòng)因

13、子。BRCC通過將一組泛素連接到P53上，這種泛素標(biāo)簽作為信使啟動(dòng)細(xì)胞的消化機(jī)制從而破壞靶蛋白。BRCC在調(diào)控自身泛素化和脫泛素化P53的機(jī)制尚不清楚。因此，本文中我們通過原核融合表達(dá)技術(shù)，表達(dá)純化了BRCC36、BRCA1502_，。54、野生型全長(zhǎng)P53，得到了可溶性的蛋白。通過圓二色譜(CD)研究了zn2對(duì)BRcc36二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響利用等溫滴定微量熱法(ITc)研究了金屬znZ與BReC36的結(jié)合，znZ與P53的結(jié)合，BRee3