神經(jīng)節(jié)苷脂GM-,3-對人單核樣白血病J6-2細胞蛋白激酶C作用機制的研究.pdf

1、該課題組前期工作也發(fā)現(xiàn),神經(jīng)節(jié)苷脂GM<,3>誘導人單核樣白血病J6-2細胞沿單核/巨噬細胞途徑分化的同時,細胞PKC活性受到抑制,但GM<,3>對PKC的作用機制尚不清楚.蛋白激酶C是一個絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族,迄今已發(fā)現(xiàn)十余個同工酶.根據(jù)其活性對二脂酰甘油和鈣離子的依賴性,可將PKC分為典型PKC（cPKC）、新PKC（cPKC）和非典型PKC（aPKC）三類.不同類型的PKC其調(diào)節(jié)機制不同.因此,要弄清GM<,3>對PKC的作

2、用機制,首先要確認受GM<,3>作用的PKC是何種類型.然而目前尚沒有一種測定細胞內(nèi)單一類型PKC活性的特異方法.已知各種類型PKC活化的首要條件是由胞漿向質(zhì)膜轉(zhuǎn)位,因此,檢測GM<,3>處理前后各型PKC在胞漿和質(zhì)膜的轉(zhuǎn)位情況將有助于判斷受GM<,3>影響的PKC類型以及對GM<,3>抑制PKC作用機制進行探討.該文采用洋地黃皂甙（Digitonin）增加細胞膜滲透性,釋放胞液蛋白,通過離心將細胞蛋白分為胞液蛋白和顆粒結(jié)合蛋白兩部分,

3、然后采用SDS-PAGE、Western blot及酶聯(lián)免疫顯色技術(shù),并結(jié)合計算機半定量掃描技術(shù),檢測了GM<,3>處理前后不同類型PKC在細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)位情況.結(jié)果發(fā)現(xiàn)：GM<,3>處理組J6-2細胞胞液部分PKCα與對照組相比顯著增加,而顆粒結(jié)合部分PKCα則相對減少.GM<,3>對其它亞型PKC在細胞中分布無顯著影響.這一結(jié)果說明,GM<,3>抑制PKCα由胞漿向質(zhì)膜轉(zhuǎn)位,對其它亞型PKC在細胞內(nèi)轉(zhuǎn)位無影響.提示GM<,3>抑制的PK