慢性阻塞性肺疾病相關(guān)性肺動(dòng)脈高壓患者血清及外周血單核細(xì)胞Rho激酶水平測(cè)定.pdf

1、目的：通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定不吸煙的健康人、吸煙但肺功能正常人群及COPD相關(guān)肺動(dòng)脈高壓患者血清、外周血單核細(xì)胞中Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)水平，比較三組研究對(duì)象血清、外周血單核細(xì)胞中ROCK1中的表達(dá)規(guī)律，探討Rho/Rho激酶信號(hào)通路在COPD相關(guān)肺動(dòng)脈高壓中的作用。
　　 方法：
　　 1.研究對(duì)象
　　 選取2010年12月至2011年4月在長(zhǎng)沙市三醫(yī)院呼吸內(nèi)科住院的慢性阻

2、塞性肺疾病(COPD)相關(guān)性肺動(dòng)脈高壓患者10人(男性6名，女性4名，平均年齡65.4±8.0歲)(C組)，同期在長(zhǎng)沙市三醫(yī)院體檢的健康不吸煙者10人(男性5名，女性5名，平均年齡62.5±7.0歲)(A組)，以及吸煙肺功能正常者10人(男性7名，女性3名，平均年齡63.7±9.0歲)(B組)。其中C組病人同時(shí)符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸分會(huì)2007年制定的(慢性阻塞性肺疾病診治指南)的診斷標(biāo)準(zhǔn)及ESC2009年制定的(肺動(dòng)脈高壓診斷與治療指南)

3、的診斷標(biāo)準(zhǔn)。三組在年齡、性別、體重上盡量匹配。
　　 2.肺功能測(cè)定
　　 所有研究對(duì)象均進(jìn)行肺功能測(cè)定，主要測(cè)定指標(biāo)為用力肺活量(FVC)、第一秒用力呼氣容積(FEV1)、FEV1/FVC及FEV1占預(yù)計(jì)值的百分比(FEV1％)。吸入支氣管擴(kuò)張劑(沙丁胺醇400ug)后FEV1/FVC仍低于70％，且經(jīng)超聲心動(dòng)圖證實(shí)有肺動(dòng)脈高壓者為C組納入標(biāo)準(zhǔn)。肺功能正常者根據(jù)是否吸煙分至B組或A組。
　　 3.肺動(dòng)脈收縮壓的

4、測(cè)定
　　 所有研究對(duì)象均通過超聲心動(dòng)圖測(cè)定安靜狀態(tài)下肺動(dòng)脈收縮壓(PASP)。
　　 4.血清Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)水平測(cè)定
　　 ①標(biāo)本采集：抽取各研究對(duì)象空腹靜脈血3ml，離心(3000R/15min20℃)留取上層血清1ml，存放于-80℃低溫冰箱中待測(cè)。
　　 ②測(cè)定方法：血清Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)水平檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，其中標(biāo)本處理

5、、測(cè)定方法和樣本濃度計(jì)算均按相關(guān)試劑盒說明書進(jìn)行。
　　 5.外周血單核細(xì)胞中Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK1)水平測(cè)定
　　 ①標(biāo)本采集：抽取各研究對(duì)象空腹靜脈血20ml，以percoll非連續(xù)密度梯度離心沉降法分離單個(gè)核細(xì)胞，并培養(yǎng)使單核細(xì)胞貼壁。再用細(xì)胞刮輕輕刮下，存放于-80℃低溫冰箱中待測(cè)。
　　 ②測(cè)定方法：將單核細(xì)胞收集后以反復(fù)凍融法裂解，離心后取上清液采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)單

6、核細(xì)胞中ROCK1水平。其中標(biāo)本處理、測(cè)定方法和樣本濃度計(jì)算均按相關(guān)試劑盒說明書進(jìn)行。
　　 結(jié)果
　　 1.三組研究對(duì)象中C組肺動(dòng)脈收縮壓顯著高于A組與B組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)。B組肺動(dòng)脈收縮壓高于A組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。
　　 2.三組研究對(duì)象中C組血清ROCK1水平高于A組，兩者之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；C組血清ROCK1水平高于B組，兩者之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；A

7、組與B組之間血清ROCK1水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　 3.三組研究對(duì)象中C組外周血單核細(xì)胞中ROCK1水平高于A組，兩者之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；C組外周血單核細(xì)胞中ROCK1水平高于B組，兩者之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；A組與B組之間外周血單核細(xì)胞中ROCK1水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　 4.三組研究對(duì)象中C組單核細(xì)胞計(jì)數(shù)高于A、B兩組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　

8、 5.三組研究對(duì)象中血清ROCK1水平與肺動(dòng)脈收縮壓呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.736，P<0.05)；外周血單核細(xì)胞中ROCK1水平與肺動(dòng)脈收縮壓呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.661，P<0.05)。
　　 結(jié)論
　　 1.三組研究對(duì)象中COPD相關(guān)肺動(dòng)脈高壓患者血清及外周血單核細(xì)胞中ROCK1水平較其它兩組高，提示Rho激酶在肺動(dòng)脈高壓發(fā)病機(jī)制中具有重要意義，血清及單核細(xì)胞中ROCK1水平可能反應(yīng)COPD相關(guān)肺動(dòng)脈高壓患者的病情