P11及其與水蛭素C肽融合基因的高效表達(dá)和功能的研究.pdf

1、P11蛋白（calpact，inⅠ，light chain）屬于S100家族的一員，又稱為S100A10，是一個(gè)包含97個(gè)氨基酸殘基的多肽（11Kda）。P11通常作為膜聯(lián)蛋白（annexinⅡ）異四聚體復(fù)合物（AⅡt）的亞基調(diào)節(jié)血液纖溶系統(tǒng)，可以單獨(dú)的或者與annexinⅡ以復(fù)合物的形式刺激組織型纖溶酶原活性因子（t-PA）調(diào)節(jié)纖溶酶原活性。在體內(nèi)P11通常以它的C-端賴氨酸殘基（K-95和K-96）結(jié)合在纖溶酶原上，與纖溶酶原的kr

2、ingle結(jié)構(gòu)相結(jié)合。P11的C末端賴氨酸構(gòu)成t-PA、纖溶酶原結(jié)合位點(diǎn)，在溶栓系統(tǒng)中P11刺激t-PA-催化的纖溶酶原激活作用增強(qiáng)46倍。P11與纖溶酶在特異的位點(diǎn)結(jié)合，形成P11-纖溶酶復(fù)合物，刺激纖溶酶自水解，從而在某些細(xì)胞表面產(chǎn)生局部的瞬間纖溶酶高活性。天然葡激酶（staphylokinase，Sak）是溶原型金黃色葡萄球菌合成的一種單鏈蛋白含有136個(gè)氨基酸，作為溶栓藥物目前已上市。它可與血栓表面的纖溶酶原1：1結(jié)合形成復(fù)合物

3、，并進(jìn)一步激活纖溶系統(tǒng)，具有較強(qiáng)的溶栓活性。水蛭素是由65個(gè)氨基酸殘基組成的單鏈多肽，能特異、高親和性地抑制凝血酶的活性，水蛭素C-端12肽是一個(gè)具有抗凝功能的結(jié)構(gòu)片段。為此我們構(gòu)建了編碼水蛭素C端12肽與P11融合蛋白的基因，對(duì)比研究在P11蛋白N-端和C-端融合后生物活性的變化，獲得具有溶栓抗凝作用的雙功能蛋白；實(shí)現(xiàn)融合基因在大腸桿菌中的高效分泌表達(dá)，建立簡(jiǎn)便、快捷的分離純化方法，為探討其藥用的可能性奠定了基礎(chǔ)。
　　 本論

4、文對(duì)P11的及其融合蛋白的功能進(jìn)行了以下兩方面的研究：
　　 1.相關(guān)研究指出P11具有一定的溶栓活性，能激活血纖溶系統(tǒng)，為此我們制備了P11蛋白。在研究中通過對(duì)P11和SAK混合物、P11、SAK的溶栓活性進(jìn)行檢測(cè)，研究發(fā)現(xiàn)P11與SAK以1/1摩爾比混合溶栓效果顯著增強(qiáng)。因此，以P11作為溶栓藥物的增效劑來增強(qiáng)溶栓活性將具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　 2.合成水蛭素12肽基因的編碼序列，通過DNA重組技術(shù)與P11核苷