骨髓巨噬細胞歸巢靜脈血栓及作用機理研究.pdf

1、[目的]探討骨髓細胞動員和靜脈血栓的關(guān)系，并觀察單核細胞趨化蛋白-3(MCP-3)對骨髓細胞動員的大鼠靜脈血栓中巨噬細胞趨化功能的影響，從而了解人重組粒細胞集落刺激因子(rhG-CSF)動員骨髓細胞對大鼠靜脈血栓機化和再通的可能機理。 [方法]成年Sprague-Dawley雄性大鼠隨機分為正常組、假手術(shù)組、血栓組和rhG-CSF組。正常組未行任何處理。假手術(shù)組大鼠的下腔靜脈未行縮窄及阻斷，余處理同血栓組。rhG-CSF組為模型

2、鼠術(shù)后當天開始連續(xù)7天在腹部皮下按25ug/kg注射rhG-CSF，其余組注射等體積生理鹽水。術(shù)前0.5h，術(shù)后1、3、5、7、10和14天采集外周血，以全自動血細胞計數(shù)分析儀檢測白細胞總數(shù)，血涂片顯微鏡下計數(shù)單個核細胞(MNC)比例；用ELISA檢測外周血中MCP-3水平；術(shù)后7天、14天取血栓組和rhG-CSF組下腔靜脈標本。切取左腎靜脈以下下腔靜脈至左右髂總靜脈匯合處，用免疫組化和圖像分析儀及電子顯微鏡觀察血栓機化率和血栓中巨噬細

3、胞密度；用RT-PCR檢測血栓中MCP-3 mRNA的表達情況。 [結(jié)果] 1.外周血MNC計數(shù)術(shù)后第3、5和7天，與血栓組外周血MNC計數(shù)(1.72±0.22×109/L，1.56±0.36×109/L，1.46±0.41×109/L)比較，rhG-CSF組外周血MNC計數(shù)(2.92±0.36×109/L，3.28±0.26x109/L，4.48±0.33×109/L)升高有顯著性差異。 2.血栓機化率和電鏡結(jié)果術(shù)后7

4、天和14天，與血栓組血栓機化率(14.64±2.32％，63.2 1±8.68％)比較，rhG-CSF組血栓的機化率(32.52±3.50％，89.54±5.62％)有顯著性差異(p＜0.01)。電鏡觀察顯示：與血栓組比較，rhG-CSF組巨噬細胞數(shù)量多，其周圍常見新生幼稚血管和成熟再通血管，巨噬細胞吞噬功能活躍。 3.巨噬細胞密度術(shù)后第7天，與血栓組血栓內(nèi)巨噬細胞密度(1.57±0.82％)比較，rhG-CSF組明顯升高(8.

5、58±1.24％，p=0.0037)；術(shù)后第14天，血栓組血栓內(nèi)巨噬細胞密度為(5.62±1.07％)，rhG-CSF組為(14.52±1.32％，p=0.0079)，巨噬細胞密度升高有顯著性差異。 4.外周血MCP-3水平術(shù)后7天假手術(shù)組、血栓組和rhG-CSF組外周血MCP-3水平(96.53±8.21，99.81±7.96，138.44±10.01)明顯升高，各組內(nèi)分別與術(shù)前比較有顯著性差異(p＜0.05)。術(shù)后14天rh

6、G-CSF組外周血MCP-3水平(108.8±9.26)雖有下降，但仍明顯高于術(shù)前水平，且高于假手術(shù)組和血栓組術(shù)后14天外周血MCP-3水平(42.68±0.56，44.82±0.68)，分別與術(shù)前、假手術(shù)組和血栓組比較p＜0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義。 5.血栓中MCP-3 mRNA表達術(shù)后7和14天，rhG-CSF組血栓中MCP-3mRNA表達較血栓組顯著升高，兩組間比較有顯著差異(P＜0.01)；術(shù)后14天血栓組MCP-3mRN

7、A表達與術(shù)后7天比較，顯著下降，而rhG-CSF組無顯著性變化。 [結(jié)論]1.靜脈壁機械性損傷聯(lián)合縮窄可穩(wěn)定建立大鼠靜脈血栓模型。 2.rhG-CSF可增加外周血趨化因子MCP-3水平和血栓中MCP-3mRNA的表達。 3.外周血MCP-3水平增高和血栓中MCP-3 mRNA表達增加引起血栓中巨噬細胞聚集增多。提示骨髓細胞動員的大鼠靜脈血栓中MCP-3能促使巨噬細胞的趨化功能增強(巨噬細胞歸巢靜脈血栓)，從而加快