異源雙鏈DNA體外錯(cuò)配修復(fù)功能檢測(cè)模型的構(gòu)建及彌漫性大B細(xì)胞性淋巴瘤中錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)的分析.pdf

1、目的:噬菌體M13mp2特殊的生活史決定了每一種噬菌體有雙鏈和單鏈兩種DNA形式,以其為材料構(gòu)建含有單堿基錯(cuò)配的異源雙鏈DNA分子,用于檢測(cè)由hMSH2-hMSH6(hMutSα)識(shí)別錯(cuò)配啟動(dòng)的修復(fù)過(guò)程;以及含有雙堿基缺失的異源雙鏈DNA分子,用于檢測(cè)主要由hMSH2-hMSH3(hMutSβ)識(shí)別插入一缺失環(huán)(insertion-deletion loop, IDL)啟動(dòng)的修復(fù)過(guò)程.以這兩種分子作為待修復(fù)模板;以TK6細(xì)胞株作為錯(cuò)配修

2、復(fù)功能完整表型,以Lovo細(xì)胞株作為錯(cuò)配修復(fù)功能缺陷表型,構(gòu)建體外錯(cuò)配修復(fù)(mismatch repair ,MMR)功能檢測(cè)模型.并使用診斷明確的遺傳性非腺瘤病性結(jié)直腸癌(herediary nonpolyposis colorectal cancer, HNPCC)及散發(fā)性大腸癌(sporadic colorectal cancer, SRC)評(píng)價(jià)該模型的檢測(cè)準(zhǔn)確性和敏感性.模型穩(wěn)定后,將其應(yīng)用于彌漫性大B細(xì)胞性淋巴瘤(diffus

3、e large B cell lymphoma, DLBCL),與其他的檢測(cè)手段一起共同探討MMR系統(tǒng)與DLBCL發(fā)病機(jī)制的相互關(guān)系.結(jié)論:以含有單堿基錯(cuò)配和雙堿基缺失的異源雙鏈DNA分子為待修復(fù)模板,以細(xì)胞株TK6為錯(cuò)配修復(fù)功能完整表型,以細(xì)胞株Lovo為錯(cuò)配修復(fù)功能缺陷表型,在國(guó)內(nèi)首次建立體外錯(cuò)配修復(fù)功能檢測(cè)模型.應(yīng)用該模型檢測(cè)診斷明確的HNPCC和SRC病人腫瘤組織的MMR功能狀態(tài),其結(jié)果與各自不同的發(fā)病機(jī)制及微衛(wèi)星狀態(tài)一致,說(shuō)明

4、該模型具有的檢測(cè)準(zhǔn)確性和敏感性.同時(shí)也說(shuō)明,國(guó)際HNPCC合作小組推薦的5個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)具有較高的檢測(cè)敏感性,是臨床工作中首選的檢測(cè)手段;而對(duì)于家族史不明確,或微衛(wèi)星穩(wěn)定,而診斷存在困難的病例直接應(yīng)用該模型進(jìn)行MMR系統(tǒng)分析,可以提供一些有意義的線(xiàn)索.通過(guò)多種檢測(cè)手段對(duì)DLBCL的檢測(cè)發(fā)現(xiàn),由hMSH2-hMSH6(hMutSα)復(fù)合物識(shí)別單堿基錯(cuò)配啟動(dòng)的錯(cuò)配修復(fù)功能的缺失可能在DLBCL發(fā)病中不起主要作用.而由hMSH2-hMSH3(h