尿毒癥患者橈動(dòng)脈鈣化與AKP、BGP、OPN表達(dá)的關(guān)系.pdf

1、背景：心血管疾病是慢性腎臟病患者致死的主要原因,,幾乎占ESRD病人總死亡人數(shù)的50％。大約20%歸因于冠狀動(dòng)脈疾病。動(dòng)脈鈣化尤其是冠狀動(dòng)脈鈣化是心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)因素之一,而深入研究表明,心血管疾病血管鈣化是關(guān)于ESRD患者全因死亡和心血管死亡的一個(gè)獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。
　　 血管鈣化主要包括兩種類(lèi)型,內(nèi)膜鈣化和中膜鈣化,前者是一種彌漫性動(dòng)脈粥樣硬化,后者呈局限性分布,和動(dòng)脈粥樣硬化風(fēng)險(xiǎn)因素?zé)o關(guān),常見(jiàn)于年輕血液透析患者。中膜鈣化發(fā)生在動(dòng)

2、脈中層,主要累及內(nèi)彈力膜,整條動(dòng)脈受累,中膜鈣化是CKD患者血管鈣化的特點(diǎn)。
　　 血管中膜鈣化,引起血管中膜厚度增加,動(dòng)脈僵硬,順應(yīng)性降低,收縮壓升高,舒張壓降低,脈壓增大。脈波速度增快。動(dòng)脈擴(kuò)張受損,后負(fù)荷加重,左心室肥厚,影響冠狀動(dòng)脈灌注。既往認(rèn)為血管鈣化僅僅是鈣磷失衡所致的鈣鹽沉積于細(xì)胞和組織間的被動(dòng)過(guò)程[4],近年來(lái)認(rèn)為血管鈣化是類(lèi)似于骨和軟骨形成的主動(dòng)的調(diào)節(jié)過(guò)程。血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)成骨細(xì)胞表型是血管鈣化過(guò)程的中心環(huán)節(jié)

3、[5]。CKD患者血管鈣化的調(diào)節(jié)機(jī)制比較復(fù)雜,目前尚未闡明?？赡芘c成骨樣細(xì)胞產(chǎn)生的膠原和非膠原的基質(zhì)蛋白有關(guān),后者包括各種蛋白如骨橋蛋白、堿性磷酸酶、骨鈣素、骨形成蛋白(BMP2)及基質(zhì)Gla蛋白質(zhì)等[6,7]。
　　 目的：本研究共分為兩個(gè)部分,第一部分研究橈動(dòng)脈內(nèi)瘺術(shù)患者血管鈣化情況;第二部分研究不同程度血管鈣化患者堿性磷酸酶(AKP)、骨鈣素(BGP)、骨橋蛋白(OPN)的蛋白及基因的表達(dá)情況,并了解三種蛋白的表達(dá)情況與動(dòng)

4、脈中膜鈣化的關(guān)系。
　　 材料與方法：
　　 1.標(biāo)本來(lái)源
　　 血管標(biāo)本取自2010年11月至2011年9月間在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院住院的尿毒癥患者進(jìn)行動(dòng)靜脈內(nèi)瘺手術(shù)切除的橈動(dòng)脈標(biāo)本共47例。標(biāo)本取得后分為兩份一份用過(guò)碘酸鹽-賴(lài)氨酸-多聚甲醛固定,另一部分保存至液氮中凍存?zhèn)銻NA提取使用。
　　 2.HE染色、茜素紅染色蘇木精-伊紅染色(HE染色),觀察血管結(jié)構(gòu),分析血管內(nèi)膜、中膜、外膜的基本層次,以及

5、是否存在其他血管病變,鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色。茜素紅染色,鈣化部分會(huì)呈現(xiàn)清晰的橘紅色,觀察血管鈣化程度,根據(jù)血管鈣化的嚴(yán)重程度分為三組,分別是無(wú)鈣化組、輕中度鈣化組、重度鈣化組。
　　 3.免疫組化檢測(cè)免疫組化檢測(cè)觀察AKP、BGP、OPN在鈣化區(qū)域的表達(dá),并分析其蛋白表達(dá)在不同的鈣化程度血管中的分布。
　　 4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)利用組織RNA提取試劑盒提取組織的總RNA,反轉(zhuǎn)錄制備成cDNA后,采用熒光定量PCR的方法

6、檢測(cè)堿性磷酸酶(AKP)、骨鈣素(BGP)、骨橋蛋白(OPN)在不同程度鈣化血管組織中的表達(dá)水平;
　　 結(jié)果：
　　 1.鈣化程度較高標(biāo)本比無(wú)鈣化標(biāo)本血管中膜明顯增厚,呈現(xiàn)出密集彌漫性鈣沉積點(diǎn)。根據(jù)定性資料的spearman相關(guān)分析,血管鈣化的程度與患者的年齡、透析時(shí)間、鈣磷乘積及全段甲狀旁腺激素水平成正相關(guān)(r均＞0,P＜0.05),有糖尿病的患者血管鈣化的程度較無(wú)糖尿病的患者高(r=0.484,P＜0.01),有頸

7、動(dòng)脈斑塊的患者血管鈣化程度較無(wú)頸動(dòng)脈斑塊的患者高(r=0.605,P＜0.01)。性別、有無(wú)高血壓病史、血鈣、血磷水平與血管鈣化程度無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)。
　　 2.免疫組化檢測(cè)觀察到AKP、BGP、OPN在鈣化區(qū)域即動(dòng)脈中膜中的蛋白表達(dá)水平。血管無(wú)鈣化組、血管輕中度鈣化組以及血管重度鈣化組之間兩兩比較蛋白表達(dá)水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05),并且血管重度鈣化組的蛋白表達(dá)水平比血管輕中度鈣化組的蛋白表達(dá)水平高,血

8、管輕中度鈣化組的蛋白表達(dá)水平比血管無(wú)鈣化組的蛋白表達(dá)水平高。
　　 3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)的方法檢測(cè)了標(biāo)本中AKP、BGP、OPN的mRNA表達(dá)水平。血管無(wú)鈣化組、血管輕中度鈣化組以及血管高度鈣化組之間兩兩比較mRNA表達(dá)水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05),并且血管重度鈣化組的mRNA表達(dá)水平比血管輕中度鈣化組的mRNA表達(dá)水平高,血管輕中度鈣化組的mRNA表達(dá)水平比血管無(wú)鈣化組的mRNA表達(dá)