大功率UVA1對(duì)增生性瘢痕的作用及機(jī)理研究.pdf

1、增生性瘢痕(hypertrophicscar,HS)是創(chuàng)傷愈合的異常結(jié)局，是以成纖維細(xì)胞增殖旺盛并分泌大量細(xì)胞外基質(zhì)，導(dǎo)致膠原的過(guò)量合成和沉積為特征的皮膚纖維化疾病。它們不僅影響病損局部的外觀形態(tài)，而且還給患者帶來(lái)瘙癢和痛苦，甚至影響患者的活動(dòng)和肢體功能。由于治療手段均非特異性，應(yīng)用過(guò)程中各有其局限性和副作用，故瘢痕的治療一直是困擾皮膚科的難題之一。UVA1(340～400nm)光療法作為較新的光學(xué)療法，在皮膚科臨床中已取得一定療效，特

2、別是近年來(lái)在硬皮病等膠原纖維增生性疾病中的應(yīng)用越來(lái)越受到重視。由此得到啟發(fā)，UVA1光療法是否可被應(yīng)用到瘢痕領(lǐng)域?目前除個(gè)別病例報(bào)道外，至今尚未見(jiàn)有更深入的研究。因此，本課題以兔耳增生性瘢痕動(dòng)物模型為研究對(duì)象，分別圍繞UVA1對(duì)該模型的影響，以及UVA1對(duì)人體增生性瘢痕的作用進(jìn)行研究，初步探討UVA1光療法對(duì)增生性瘢痕的治療作用及可能的作用機(jī)制。 一、增生性瘢痕動(dòng)物模型的建立 目的：建立一種兔耳增生性瘢痕動(dòng)物模型，觀察兔

3、耳腹側(cè)創(chuàng)面在傷后不同時(shí)間瘢痕增生的情況。 方法：于38只新西蘭兔的72只耳腹面手術(shù)切除2cm×5cm全層皮膚，創(chuàng)面用1％磺胺嘧啶銀冷霜外敷包扎至愈合，隔日換藥1次。以未行手術(shù)的4只兔耳作對(duì)照。術(shù)后連續(xù)8個(gè)月觀察兔耳創(chuàng)面自然愈合情況：用光鏡觀察兔耳創(chuàng)面瘢痕增生情況；分別用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)和游標(biāo)卡尺測(cè)量瘢痕膠原含量和瘢痕指數(shù)變化情況。 結(jié)果：兔耳創(chuàng)面上皮化后其色澤、厚度和質(zhì)地均經(jīng)歷從瘢痕形成、成熟到退化的演變過(guò)程；1個(gè)月的

4、瘢痕指數(shù)0.41±0.14，膠原含量30.69±12.39，分別較3～8個(gè)月為低(P＜0.05)，其變化與人體增生性瘢痕增生程度的消長(zhǎng)趨勢(shì)吻合。 結(jié)論：兔耳腹面全層皮膚缺損誘導(dǎo)的增生性瘢痕動(dòng)物模型與人體增生性瘢痕相似，該模型可作為研究增生性瘢痕的發(fā)生機(jī)制及評(píng)估其治療方法的較好的動(dòng)物模型。 二、大功率UVA1對(duì)兔耳增生性瘢痕動(dòng)物模型的影響 目的：探討不同劑量大功率UVA1對(duì)全層皮膚缺損誘導(dǎo)的兔耳增生性瘢痕動(dòng)物模型的

5、影響情況。 方法：一批新西蘭白兔雙耳腹面手術(shù)切除2cm×5cm全層皮膚至筋膜，建立兔耳增生性瘢痕模型后，隨機(jī)分成4組，每組6只兔，將每只兔左耳分別于傷后同時(shí)、1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月開(kāi)始用不同劑量大功率UVA1照射，右耳為非照射組。各照射組又分為兩個(gè)劑量照射組，兔耳分別每次照射UVA160J/cm2、110J/cm2，連續(xù)30次。 結(jié)果：創(chuàng)傷建模1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月后開(kāi)始照射UVA1組，與照射前比較，高劑量組照射后瘢痕處

6、真表皮厚度、真皮膠原含量和瘢痕指數(shù)均顯著降低(P＜0.05)；照射組與非照射組在UVA1照射前后差值的比較，高劑量組照射后瘢痕處表真皮厚度差值和真皮膠原含量差值的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；各照射組UVA1對(duì)瘢痕皮膚厚度和膠原含量的影響均存在劑量依賴(lài)性(P＜0.05)。而創(chuàng)傷建模的同時(shí)照射UVA1組，兩種劑量的UVA1照射后瘢痕處皮膚厚度、膠原含量和瘢痕指數(shù)較非照射耳均顯著增加(P＜0.05)。 結(jié)論：上皮化后開(kāi)始照射高劑

7、量UVA1可使瘢痕組織變軟、皮膚厚度變薄，膠原含量降低，且均呈劑量依賴(lài)性。而創(chuàng)傷同時(shí)照射UVA1不僅不能阻止瘢痕模型的建立，反而加重瘢痕。 三、大功率UYA1對(duì)兔耳增生性瘢痕模型影響的機(jī)理研究 在前兩章研究的基礎(chǔ)上，又檢測(cè)了UVA1照射前后羥脯氨酸的含量變化及運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法研究了UVA1照射前后基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶1組織抑制劑(TIMP-1)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)、細(xì)胞核增殖抗

8、原(PCNA)、α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)的表達(dá)情況；通過(guò)透射電鏡觀察UVA1照射前后超微結(jié)構(gòu)、成纖維細(xì)胞和膠原纖維形態(tài)的變化。 結(jié)果顯示： ①創(chuàng)傷后1個(gè)月，2個(gè)月和3個(gè)月的瘢痕，經(jīng)中高劑量UVA1照射后，羥脯氨酸含量均顯著降低(P＜0.05)；而創(chuàng)傷同時(shí)UVA1照射后其含量卻顯著增加： ②中高劑量UVA1均可顯著抑制創(chuàng)傷后1個(gè)月，2個(gè)月和3個(gè)月瘢痕的TGF-β1的表達(dá)(P＜0.05)；而高劑量UVA1反而促

9、進(jìn)創(chuàng)傷同時(shí)照射組瘢痕的TGF-β1表達(dá)； ③中高劑量UVA1均可顯著促進(jìn)創(chuàng)傷后1個(gè)月，2個(gè)月和3個(gè)月瘢痕的MMP-1的表達(dá)(P＜0.05)：而高劑量UVA1卻抑制創(chuàng)傷同時(shí)照射組瘢痕的MMP-1的表達(dá)； ④只有高劑量的UVA1才能抑制創(chuàng)傷后1個(gè)月，2個(gè)月和3個(gè)月組瘢痕的TIMP-1的表達(dá)(P＜0.05)；而中高劑量UVA1均可促進(jìn)創(chuàng)傷同時(shí)照射組瘢痕的TIMP-1的表達(dá)； ⑤中高劑量UVA1均可顯著抑制創(chuàng)傷后1個(gè)月瘢

10、痕的a-SMA的表達(dá)，而只有高劑量UVA1才能抑制創(chuàng)傷后2個(gè)月瘢痕的a-SMA的表達(dá)，無(wú)論中等劑量還是高劑量UVA1均不能抑制創(chuàng)傷后3個(gè)月的瘢痕a-SMA的表達(dá)；無(wú)論中等劑量還是高劑量反而均可以增加創(chuàng)傷同時(shí)照射組瘢痕a-SMA的表達(dá)率； ⑥中高劑量UVA1均可顯著抑制創(chuàng)傷后1個(gè)月，2個(gè)月和3個(gè)月瘢痕的PCNA的表達(dá)(P＜0.05)；而中高劑量UVA1均促進(jìn)創(chuàng)傷同時(shí)照射組瘢痕的PCNA的表達(dá)。 ⑦透射電鏡結(jié)果：照射前瘢痕成

11、纖維細(xì)胞胞漿豐富，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張呈池狀，可見(jiàn)多個(gè)高爾基體及分泌小泡形成，顯示細(xì)胞代謝旺盛，合成功能活躍，處于活躍期；UVA1照射后瘢痕成纖維細(xì)胞胞漿變少，細(xì)胞器欠發(fā)達(dá)，多數(shù)為靜止的纖維細(xì)胞。此外還發(fā)現(xiàn)經(jīng)UVA1照射后膠原纖維直徑變細(xì)。 本研究結(jié)果初步表明：UVA1對(duì)瘢痕的治療作用可能與其抑制TGF-β1、TIMP-1、PCNA和α-SMA的表達(dá)，同時(shí)促進(jìn)MMP-1的表達(dá)，從而促進(jìn)基質(zhì)蛋白降解及抑制成纖維細(xì)胞和肌成纖維細(xì)胞的增殖活

12、性致使膠原合成減少有關(guān)。而如果UVA1過(guò)早干預(yù)，則會(huì)出現(xiàn)相反的結(jié)果。 四、大功率UVA1在膠原纖維增生性疾病中的應(yīng)用 基于上述關(guān)于大功率UVA1光治療儀對(duì)增生性瘢痕動(dòng)物模型的研究，又進(jìn)行了應(yīng)用大功率UVA1光療法治療膠原纖維增生性疾病的臨床觀察。到目前為止有7例瘢痕患者，3例硬皮病患者，1例脛前粘液性水腫和1例成人硬腫病患者入選并完成療程。經(jīng)每日照射UVA1(110J/cm2)1次，連續(xù)4周后，通過(guò)觀察皮損厚度、柔軟性、

13、瘙癢、疼痛或緊繃感的改善程度，患者自身及醫(yī)生分別對(duì)其作出評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示12例完成整個(gè)療程的患者經(jīng)過(guò)治療后，皮損厚度均有顯著下降。所有病例無(wú)論皮膚硬度、緊繃感和瘙癢感積分均有顯著下降；患者與醫(yī)生評(píng)價(jià)基本相符。整個(gè)療程中除出現(xiàn)照射部位輕微色素沉著外均未出現(xiàn)其他不良反應(yīng)。沒(méi)有患者在治療后出現(xiàn)瘢痕面積增大、積分增多的情況。本研究說(shuō)明UVA1光療法對(duì)膠原纖維增生性疾病有著良好的臨床療效，但其遠(yuǎn)期療效及UVA1光療法是否可促進(jìn)其它治療方法(如皮損內(nèi)