基于TACI和BAFF結(jié)構(gòu)的BAFF拮抗肽的研究.pdf

1、B細(xì)胞活化因子（BAFF），是1999年發(fā)現(xiàn)的腫瘤壞死因子配體超家族的成員，BAFF能夠促進(jìn)B細(xì)胞增殖、分化和成熟，并能維持B細(xì)胞的生理功能，在體液免疫反應(yīng)中發(fā)揮著非常重要的作用。正常生理?xiàng)l件下，BAFF通過(guò)與三個(gè)已知受體——TACI、BCMA和BR3的特異性結(jié)合，可調(diào)節(jié)B細(xì)胞功能和維持機(jī)體免疫平衡。而B(niǎo)AFF的缺乏會(huì)導(dǎo)致機(jī)體免疫功能低下，引起免疫缺陷?。籅AFF的過(guò)量表達(dá)則會(huì)誘發(fā)B細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫和B細(xì)胞惡性增殖，引起多種疾病如系統(tǒng)

2、性紅斑狼瘡（SLE）、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）、干燥綜合征（SS）和B淋巴細(xì)胞瘤。對(duì)于免疫缺陷病，可以采取補(bǔ)充BAFF的方法來(lái)進(jìn)行治療；而對(duì)于自身免疫病和B淋巴細(xì)胞瘤，則需要以BAFF或B細(xì)胞為靶點(diǎn)來(lái)進(jìn)行其功能的抑制而實(shí)現(xiàn)治療。目前，以BAFF為靶點(diǎn)來(lái)抑制BAFF功能的研究主要包括抗BAFF單克隆抗體、BAFF的可溶性受體和抑制性短肽，其中，基于BCMA和BR3結(jié)構(gòu)的拮抗肽已經(jīng)被證明具有一定的抑制BAFF與相應(yīng)受體結(jié)合的作用。本課題是研究

3、以TACI和BAFF的3D結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)而設(shè)計(jì)和合成得到拮抗肽，通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，初步證明了以TACI型短肽作為治療手段具有一定的可行性。具體研究結(jié)果如下：
　　（1）以pET-30a-BAFF1為基礎(chǔ)，利用不同的內(nèi)切酶和引物，構(gòu)建得到一個(gè)新的重組表達(dá)載體——pET-30a-BAFF2，在相同的誘導(dǎo)表達(dá)和純化條件下，獲得可溶性的BAFF1、BAFF2蛋白。
　?。?）采用間接法ELISA，以BAFF作為抗原，TACI-Fc作為一抗，

4、證明了純化得到的BAFF1和BAFF2都具有生物學(xué)活性，都能與TACI-Fc在體外發(fā)生顯著的特異性結(jié)合，而且BAFF2比BAFF1呈現(xiàn)出更強(qiáng)的結(jié)合活性，TACI-Fc與BAFF2結(jié)合的飽和濃度約為10μg/mL。
　?。?）利用設(shè)計(jì)和合成得到的兩種基于TACI關(guān)鍵氨基酸殘基的拮抗肽——TA和TC，來(lái)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性ELISA，證明了TA、TC具有特異性抑制BAFF2與TACI-Fc結(jié)合的作用；與無(wú)關(guān)肽NRP維持7％的抑制率相比，拮抗肽T