IL-17A在心肌缺血再灌注損傷中的作用及機制研究.pdf

1、目的：炎癥反應作為重要的機制參與心肌缺血再灌注損傷(MIRI)的發(fā)生發(fā)展,促炎癥性細胞因子白介素-17A(IL-17A)參與多種心血管疾病的發(fā)生發(fā)展,如冠狀動脈粥樣硬化,病毒性心肌炎等,然而它在MIRI中的作用尚未明確。本實驗的目的是觀察IL-17A對小鼠MIRI的影響。
　　方法：用阻斷冠狀動脈前降支的方法制作小鼠MIRI的模型,Realtime-PCR及westernblot方法動態(tài)觀察再灌注后不同時間點(1小時,4小時,12

2、小時,24小時,72小時)心肌組織IL-17A的表達水平,流式細胞術(shù)進一步檢測IL-17A的來源(CD4+T細胞,gdT細胞,中性粒細胞,NK細胞)。Realtime-PCR檢測心肌中IL-17家族的其他成員的表達(IL-17B,IL-17C,IL-17D,IL-17E,IL-17F)。分別于再灌注前5min給與IL-17A中和性抗體及外源性IL-17A,以阻斷或增強MIRI小鼠體內(nèi)IL-17A效應,于再灌注后1天和3天檢測MIRI指標

3、,包括Evan’sblue和TTC雙染及血清肌鈣蛋白評價危險區(qū)域和梗死面積;超聲心動圖和左心導管檢測左室射血分數(shù)(EF)、左室短軸縮短率(FS)、左室舒張末期壓力(LVEDP)、左室壓力最大上升速率(+dP/dtmax)和和最小下降速率(-dP/dtmin)評價心功能。運用IL-17A遺傳缺陷的小鼠(IL-17Aknockout,Il17a–/–)建立MIRI模型,與野生型小鼠對比,于再灌注1天評價上述MIRI指標。
　　結(jié)果：再

4、灌注1小時心肌中的IL-17AmRNA和蛋白水平表達升高,隨后持續(xù)上升,于24小時達到高峰,72小時表達下降,但仍高于假手術(shù)組(Sham)。浸潤心臟的分泌IL-17A的CD45+白細胞中,95％以上是CD3+T細胞,其中g(shù)dT細胞占大部分(70%),CD4+T細胞所占比例較小(13%),而Gr-1+中性粒細胞和NK1.1+自然殺傷細胞所占比例極小(1%)。在IL-17家族中,IL-17A的表達最豐富,明顯高于其他IL-17家族的成員,是

5、與其同源性最高的IL-17F的5倍。與同型對照抗體組(Isotype)相比,IL-17A中和性抗體(Anti-IL-17A)組小鼠的心肌梗死面積明顯減小,心功能得到改善,表現(xiàn)為梗死部分/危險區(qū)域(I/AAR)和肌鈣蛋白均減小,EF,FS,+dP/dtmax,-dP/dtmin均升高,LVEDP降低。與介質(zhì)對照組(Vehicle)相比,外源性IL-17A組(rIL-17A)小鼠則梗死面積增加,心功能進一步惡化。與野生型小鼠(wildtyp