阻斷γ鏈族細(xì)胞因子在心肌缺血再灌注損傷中的保護(hù)作用.pdf

1、目的：
　　 通過CP-690550阻斷γ鏈族細(xì)胞因子與JAK-STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的聯(lián)系，探求其對γ鏈族細(xì)胞因子在即時免疫中的影響及對缺血再灌注心肌明確的保護(hù)作用。
　　 方法：
　　 本研究采用大鼠心臟腹部移植術(shù)建立心肌缺血再灌注損傷模型：取出供體大鼠心臟，將供體心臟主動脈、肺動脈分別和受體大鼠腹主動脈、下腔靜脈進(jìn)行端側(cè)吻合，術(shù)后供心復(fù)跳，受體大鼠存活為模型建立成功標(biāo)志，受體原心臟不予任何處理。
　　

2、 實驗分為5組：對照組6只、模型組6對(心臟供體和受體為一對)、CP-690550高劑量組(20mg/kg)6對、CP-690550中劑量組(15mg/kg)6對、CP-690550低劑量組(10mg/kg)6對。成功建立大鼠心臟腹部移植模型后，各給藥組立即給予不同濃度的CP-690550灌胃，模型組及對照組給相應(yīng)量生理鹽水灌胃。12h后，各組再次給藥。24h后處死動物，腹腔靜脈取血，摘取供體心臟。保存血清、心肌組織及組織勻漿進(jìn)行相應(yīng)指

3、標(biāo)檢測。
　　 檢測方法及觀察指標(biāo)：
　　 (1)酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血清中IL-2、IL-4、IL-7、IL-15變化及相關(guān)生化法檢測心肌組織中CK、LDH、SOD、MDA的含量。
　　 (2)蘇木精-伊紅染色法(HE法)觀察心肌形態(tài)學(xué)改變。
　　 (3)免疫組織化學(xué)法(SABC法)檢測心肌組織中Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)。
　　 (4)原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法(TUNEL法)檢測心肌

4、細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)果：
　　 1、模型組同正常組比較，血清IL-2、IL-7、IL-15表達(dá)升高(P<0.001)，IL-4則降低(P<0.001)；給藥組與模型組比較，血清IL-2、IL-7、IL-15表達(dá)降低(P<0.05)，IL-4表達(dá)升高(P<0.05)。
　　 2、模型組與正常組比較SOD(P<0.001)、CK(P<0.001)、LDH(P<0.05)活性降低，MDA的含量升高(P<0.01)：給藥

5、組與模型組比較SOD、CK、LDH活性則升高(P<0.05)，MDA的含量降低(P<0.05)。
　　 3、模型組心肌細(xì)胞腫脹、變形、部分心肌纖維橫紋不清或消失；和模型組比較，給藥組心肌細(xì)胞變性壞死的程度較輕，細(xì)胞大體形態(tài)健全。
　　 4、模型組Bax蛋白表達(dá)增多、Bcl-2蛋白基本未見表達(dá)，心肌細(xì)胞出現(xiàn)大量凋亡。和模型組比較，給藥組Bax蛋白表達(dá)較少、Bcl-2蛋白表達(dá)增多，細(xì)胞凋亡程度均較輕。
　　 結(jié)論：<

6、br>　　 1、缺血再灌注損傷發(fā)生時，促炎因子IL-2、IL-7、IL-15的含量顯著升高，抗炎因子IL-4顯著降低。γ鏈族細(xì)胞因子與損傷密切相關(guān)。阻斷JAK3-STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路干擾γ鏈族細(xì)胞因子的表達(dá)，能夠保護(hù)缺血再灌注心肌。
　　 2、CP-690550可以減輕心臟移植缺血再灌注模型心肌損傷，其機(jī)制是通過：①干預(yù)γ鏈族細(xì)胞因子：降低促炎因子、升高抗炎因子；②抗氧自由基損傷：增強(qiáng)心肌SOD、CK、LDH的活性，降低MDA