黃顙魚重要免疫基因的克隆及低磷飼料中添加維生素D3對(duì)其表達(dá)影響的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)克隆并分析了黃顙魚（Pelteobagrus fulvidraco）相關(guān)免疫基因(AP1M1，MHC-Ⅱ，IFP35)的全長(zhǎng)cDNA信息以及組織分布，并在低磷飼料中添加維生素D3，探討了維生素D3對(duì)黃顙魚相關(guān)免疫基因(AP1M1，MHC-Ⅱ，IFP35)表達(dá)的影響。
　　養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)一共8周，初始體重為2 g左右，分為對(duì)照組(維生素的添加水平為0IU/kg)和實(shí)驗(yàn)組（維生素的添加水平為5000 IU/kg）共兩組，養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)結(jié)束后

2、分別取對(duì)照及處理組黃顙魚的腸、腎、肝三種組織及未經(jīng)過(guò)任何實(shí)驗(yàn)處理的黃顙魚腸、腎、肝、鰭條、肌肉、皮膚、鰓、腦、頭腎9種組織開展相關(guān)研究，取得研究結(jié)果如下:
　　(1)采用RACE法獲得黃顙魚AP1M1，MHC-Ⅱ，IFP35基因cDNA全長(zhǎng):AP1M1基因全長(zhǎng)1814 bp，其中ORF（open reading frame）822 bp，編碼273個(gè)氨基酸，5'UTR（5'端非翻譯區(qū)）121 bp，3'UTR（3'端非翻譯區(qū)）87

3、1 bp; MHC-Ⅱ基因全長(zhǎng)1074 bp，其中ORF（open reading frame）708 bp，編碼236個(gè)氨基酸，5'UTR（5'端非翻譯區(qū)）78 bp，3'UTR(3'端非翻譯區(qū))259 bp; IFP35基因全長(zhǎng)1810 bp，其中ORF(open readingframe)1128 bp，編碼376個(gè)氨基酸，5'UTR（5'端非翻譯區(qū)）97 bp，3'UTR（3'端非翻譯區(qū)）585 bp。
　　(2)對(duì)黃顙魚

4、AP1M1，MHC-Ⅱ，IFP35三條基因cDNA全長(zhǎng)進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，得到:黃顙魚AP1M1基因ORF氨基酸序列與斑點(diǎn)叉尾鮰（Ictalurus punctatus）的氨基酸序列相似度最高為91.6％，與秀美花鳉(Poecilia formosa)的氨基酸序列相似度最低為84.7％。黃顙魚MHC-Ⅱ基因ORF氨基酸序列與長(zhǎng)吻鮠（Leiocassislongirostris）的氨基酸序列相似度最高為69.5％，與錦鯉（Cyprinu

5、s carpio）的氨基酸序列相似度最低為50.4％。黃顙魚IFP35基因ORF氨基酸序列與斑點(diǎn)叉尾鮰的氨基酸序列相似度最高為79.0％，與大西洋鮭（Salmo salar）的氨基酸序列相似度最低為50.4％。
　　(3)通過(guò)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)分析AP1M1，MHC-Ⅱ，IFP35基因的組織表達(dá)，得到:AP1M1、IFP35基因在9種組織中均表達(dá)，MHC-Ⅱ基因在小腸、鰭條、肌肉、肝臟、鰓5種組織中有表達(dá)。
　　(4)通過(guò)熒

6、光定量PCR實(shí)驗(yàn)分析飼料維生素D3的影響，得到AP1M1，MHC-Ⅱ，IFP35基因在黃顙魚腸、腎、肝三種組織中對(duì)照及處理組的表達(dá)情況，得到:AP1M1基因在三種組織對(duì)照及處理組中均表達(dá)，但飼料維生素D3顯著上調(diào)肝臟中AP1M1基因的表達(dá)(P＜0.05);MHC-Ⅱ基因在對(duì)照組小腸，腎臟和肝臟無(wú)表達(dá)，但飼料維生素D3顯著上調(diào)MHC-Ⅱ基因在小腸和腎臟中的表達(dá)(P＜0.05);IFP35基因在對(duì)照及處理組中三種組織均表達(dá)，但飼料維生素D3