配伍紅花籽油增強(qiáng)腦細(xì)胞及其線粒體對自由氧基介導(dǎo)的細(xì)胞損傷的抵抗機(jī)制研究.pdf

1、目的：①制備由α-亞麻酸和亞油酸按不同比例混合而成的標(biāo)準(zhǔn)配伍紅花籽油；②建立H2O2誘導(dǎo)的腦細(xì)胞(PC12細(xì)胞株)損傷(凋亡)模型及研究配伍紅花籽油增強(qiáng)腦細(xì)胞抵抗自由氧基介導(dǎo)的細(xì)胞損傷的機(jī)制；③利用H2O2/Fe2+誘導(dǎo)的線粒體損傷體系研究配伍紅花籽油抑制脂質(zhì)過氧化的能力。 方法：①制備配伍紅花籽油并利用GC(氣相色譜法)法測定α-亞麻酸和亞油酸含量；②建立H2O2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡模型，利用MTT法、流式細(xì)胞技術(shù)及熒光成像

2、技術(shù)等方法對不同濃度的配伍紅花籽油(0.5％DMSO溶液)藥物干預(yù)進(jìn)行分析，確定PC12細(xì)胞的活力和量效關(guān)系；③用改良的Clark技術(shù)提取大鼠腦線粒體，建立H2O2/Fe2+氧化損傷體系，檢測配伍紅花籽油藥物干預(yù)前后的線粒體褐脂質(zhì)、膜的流動(dòng)性、ATPase活性、膨脹度等指標(biāo)變化。 結(jié)果：①利用本實(shí)驗(yàn)方法提取的混合十八碳二、三烯酸中α-亞麻酸(ALA)、亞油酸(LA)的含量分別達(dá)62.49％和22.91％，滿足配伍紅花籽油的要求；

3、②H2O2誘導(dǎo)細(xì)胞損傷(凋亡)的最低濃度為200μM，配伍紅花籽油對腦細(xì)胞(PC12細(xì)胞)抵抗自由氧基損傷產(chǎn)生作用的最低濃度為0.3mg/ml；③配伍紅花籽油濃度在0.3-0.5mg/ml時(shí)，可以明顯提高線粒體抑制脂質(zhì)過氧化的能力，從而改善線粒體膜流動(dòng)性、膨脹度和ATP酶(ATPase)活性。 結(jié)論：①提取與制備配伍紅花籽油的方法具有可重復(fù)性和可行性；②H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷模型可以用于配伍紅花籽油的細(xì)胞藥物干預(yù)試驗(yàn)，而且具有可