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1、本實(shí)驗(yàn)利用AFLP(AmplifiedFragmentLengthPolymorphism)技術(shù)對(duì)23個(gè)牡丹品種進(jìn)行了多態(tài)性研究。采用改進(jìn)的SDS方法,從牡丹成熟葉片中提取基因組DNA,所得DNA樣品的A260/A280在1.7~1.8之間,瓊脂糖凝膠電泳主帶清晰、DNA純度高、較少降解、不含酶反應(yīng)抑制劑,可被MseⅠ和PstⅠ兩種限制性內(nèi)切酶完全酶切。通過(guò)酶切連接、預(yù)擴(kuò)增、選擇性擴(kuò)增、銀染等試驗(yàn)過(guò)程,成功建立了牡丹品種AFLP銀染反應(yīng)
2、體系,得到了清晰的指紋圖譜。 通過(guò)8對(duì)引物對(duì)牡丹基因組DNA進(jìn)行了檢測(cè),共得到了243條譜帶,平均多態(tài)性比率為80.3%。用SPSS11.5軟件AverageLinkage(withingroup)進(jìn)行的聚類分析結(jié)果表明:這23個(gè)牡丹品種被聚為2類即中原牡丹品種為一類,日本牡丹品種為一類;種源組成不同的牡丹品種各自聚在一起,與孟麗等的研究結(jié)果一致,即產(chǎn)地來(lái)源對(duì)牡丹品種親緣關(guān)系的影響比其他性狀更為突出,同時(shí)從分子水平上證明了種源組
3、成是品種分類的前提性標(biāo)準(zhǔn)。 這2個(gè)遺傳聚類組的劃分與牡丹品種花型、花色的形態(tài)學(xué)劃分并不完全一致,與孟麗等研究結(jié)果一致?;ㄐ拖嗤哪档て贩N并不一定聚在一起,花色相同的牡丹品種也不一定聚集在一起,只有在其他形態(tài)學(xué)性狀相差不大時(shí)才聚在一起,也即只有親緣關(guān)系較近時(shí)才會(huì)聚在一起。由此可以看出,AFLP技術(shù)比單一的形態(tài)學(xué)性狀更能真實(shí)地反映出牡丹品種間的親緣關(guān)系,因此,AFLP技術(shù)是研究牡丹品種分類和進(jìn)化的理想工具之一。 從遺傳聚類圖
4、上可以看出,在中原牡丹品種群中,傳統(tǒng)品種銀粉金鱗與其他品種親緣關(guān)系最遠(yuǎn),青山貫雪與金星雪浪關(guān)系最近;在日本牡丹品種中,扶桑司與其他日本品種的親緣關(guān)系最遠(yuǎn),吉野川與花遊關(guān)系最近;牡丹花期的早晚與牡丹品種親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近沒(méi)有一致性,因此不適合作牡丹品種分類的標(biāo)準(zhǔn)。 本試驗(yàn)豐富了牡丹組植物分子系統(tǒng)學(xué)的研究,得到了部分牡丹品種之間的遺傳距離圖譜,為進(jìn)一步研究牡丹組植物的演化關(guān)系奠定了基礎(chǔ);利用這種親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近可為我國(guó)牡丹新品種的培育提供
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