23價(jià)肺炎球菌多糖疫苗刺激大鼠肺組織β-防御素-2的表達(dá)研究.pdf

1、研究背景和目的:該研究的目的旨在了解老齡大鼠與青年大鼠肺組織表達(dá)β-防御素-2有無差別,及23價(jià)肺炎球菌多糖疫苗能否刺激大鼠肺組織表達(dá)β-防御素-2,這將為探討防御素在人類老年肺部免疫中的作用,老年人群呼吸道易感染性是否與防御素的低表達(dá)有關(guān),經(jīng)過刺激能否誘導(dǎo)表達(dá)及有無應(yīng)用前景提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).方法:實(shí)驗(yàn)組Wistar老齡大鼠(18~22月)、青年大鼠(2~3月)各10只(由四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)中心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)分別腹腔注射23價(jià)肺炎球菌多糖

2、疫苗(由默沙東公司提供)0.2ml/kg,對(duì)照組各10只給以同等量的生理鹽水,同樣條件下正常飼養(yǎng)觀察24小時(shí)后處死.在無菌條件下使用0.1﹪焦碳酸二乙酯(diethylphosphoryl cyanide,DEPC)處理過的器械取大鼠右肺組織100mg,同時(shí)用1xPBS進(jìn)行左肺支氣管肺泡灌洗、1xPBS沖洗后采用瓊脂糖彌散法進(jìn)行抑菌試驗(yàn);使用一步法reverse transcription pol ymerase chain react

3、ion(RT-PGR)試劑盒使其逆轉(zhuǎn)錄cDNA,擴(kuò)增得到特異性產(chǎn)物,經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳,各樣本β-防御素-2mRNA水平用rat β-defensin-2(RBD-2)的校正光密度值與β-actin的校正光密度值之比表示.各組大鼠肺組織HE染色,比較各組之間β-防御素-2的表達(dá)量及灌洗液抑菌性的大小、病理變化有無差別.結(jié)論:老年大鼠肺組織β-防御素-2表達(dá)量低于青年大鼠,但在統(tǒng)計(jì)學(xué)上沒有顯著性差異,提示防御素在老年大鼠仍然是天然免疫的重要