β-防御素2在急性肝損傷大鼠小腸中表達及意義.pdf

1、Marshall[1]于1998年正式提出關于腸-肝軸的概念。肝臟和腸道具有共同的胚胎起源:前腸、腸道淋巴細胞是從發(fā)育中的肝臟發(fā)育而來，大量的研究資料顯示肝臟和腸道在解剖學及生物學功能上具有密不可分的關系。在解剖關系上，門靜脈是肝臟和腸道聯(lián)系的橋梁，肝臟80％的血液供應來自門靜脈，門靜脈有來自腸道的營養(yǎng)物質、食物抗原、細菌產(chǎn)物及環(huán)境毒素等。
　　多種原因均可以引起急性肝損傷的發(fā)生，急性肝損傷后將會發(fā)生一系列的并發(fā)癥，嚴重的將會發(fā)生

2、急性肝功能衰竭。當肝臟受到損傷時，肝臟的枯否氏細胞功能將被受到抑制，一方面腸道內的細菌及內毒素會入侵血液循環(huán)系統(tǒng)導致腸源性的感染;另一方面侵入肝臟的內毒素激活枯否氏細胞，多種炎癥因子被釋放出來，這些炎癥因子相互作用進一步加重腸道粘膜屏障的破壞。
　　防御素存在于腸道上皮細胞中，起到重要的防護作用。β-防御素2(β-defensin-2，HBD-2)的研究是熱點問題。β-防御素2作為一種可誘導表達防御素，在皮膚、呼吸道、消化道廣泛分

3、布，它具有抗菌活性廣，在參與機體先天性免疫及獲得性免疫中具有重要作用。肝損傷腸道中β-防御素2表達如何？本實驗建立了不同急性肝損傷模型，旨在探討不同急性肝損傷腸道中β-防御素2的表達。
　　目的:建立不同的肝損傷模型，觀察腸道中β-防御素2表達。
　　方法:①選擇健康SD大鼠隨機分為三組，分別為四氯化碳組、2-AAF/PH組及空白對照組。分別于1d、7d、14d、21d處死動物取肝臟組織和小腸組織。②采用hematoxyli

4、n&eosin staining(H&E染色)觀察大鼠肝組織及小腸病理組織學表現(xiàn)。③Western Blotting檢測技術觀察β-防御素2在腸道中蛋白表達。④RT-PCR技術檢測觀察β-防御素2在腸道中基因表達。
　　結果:①與空白對照組相比，2-AAF/PH組第1天時肝臟顏色為淡紅色，質脆，隨時間推移約21天后肝臟顏色恢復正常。四氯化碳組與之比較，大鼠肝臟呈暗紅色，質脆，約14天后恢復正常;②肝臟組織H&E結果顯示，與空白對照

5、組相比，四氯化碳組、2-AAF/PH組可見肝細胞腫脹，排列紊亂，炎癥細胞浸潤。2-AAF/PH組炎癥細胞浸潤明顯比四氯化碳組多，細胞腫脹最嚴重。③腸道組織病理結果示，2-AAF/PH組腸黏膜損傷較嚴重，腸黏膜脫落，腸絨毛排列紊亂，炎癥細胞浸潤，隨著肝損傷的修復，腸道損傷恢復正常;四氯化碳組腸黏膜損傷較2AAF/PH組輕，腸黏膜輕度脫落，有少許炎癥細胞浸潤，也是隨著肝損傷的修復，腸道黏膜恢復到正常。④血清肝功能結果顯示，大鼠造模成功后第1

6、天空白對照組肝功能沒有明顯變化;四氯化碳組、2-AAF/PH組與空白對照組相比大鼠丙氨酸氨基轉移酶（alanine aminotrans ferase，ALT）、天門冬氨酸氨基轉移酶（aspartate aminotransferase，AST）及堿性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)水平明顯升高（ALT:47.01±9.36 U/L vs41.98±6.65 U/L，P＜0.05;249.1±19.72 U/L

7、vs41.98±6.65 U/L,P＜0.05; AST:133.96±14.36U/L vs82.48±21.87 U/L，P＜0.05;557.97±12.86 U/L vs82.48±21.87U/L,P＜0.05; ALP:270.32±36.08Uvs53.27±8.51U,P＜0.05;520.67±33.01 U vs53.27±8.51U，P＜0.05），白蛋白(albumin，ALB)水平明顯下降（23.36±2.22

8、g/L vs32.14±3.73 g/L，P＜0.05;23.9±1.05 g/L vs32.14±3.73 g/L，P＜0.05）。四氯化碳組和2-AAF/PH組之間比較，2-AAF/PH組肝功能變化較大。⑤β-防御素2變化情況:RT-PCR結果顯示，空白對照組1天、7天、14天、21天各時間點無明顯差別（1.090±0.0041.092±0.0031.089±0.0021.087±0.002 P＞0.05）;四氯化碳組和2-AAF/

9、PH組β-防御素2 mRNA的量，1天、7天、14天三個時間點與空白對照組比較，都增高，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，第21天時與空白對照組比較無明顯差別，沒有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，2-AAF/PH組與四氯化碳組1天、7天、14天比較，都顯著升高，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，21天與四氯化碳組比較，無明顯變化，沒有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，在空白對照組各時間點無明顯變化(P＞0.05);Western Blot結果與PCR

10、結果一致，2-AAF/PH組β-防御素-2蛋白水平表達1天、7天、14天（1.90±0.071.60±0.021.41±0.01）較空白對照組（1.04±0.031.04±0.031.03±0.01）明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義P＜0.05，第21天時（1.06±0.06）與空白對照組（1.04±0.03）比較無明顯變化，無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），2-AAF/PH趨勢為第1-21天呈下降趨勢，第21天時和空白對照組一致;四氯化碳組1天