長(zhǎng)豐鯽c型和g型溶菌酶基因的克隆及其在細(xì)菌感染條件下的表達(dá)分析.pdf

1、長(zhǎng)豐鯽（ChangFeng Carassius auratus gibelio）（品種登記號(hào):GS-04-01-2015）肉質(zhì)嫩、生長(zhǎng)快、遺傳穩(wěn)定，市場(chǎng)應(yīng)用前景非常廣闊。但近年來(lái)，隨著我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖規(guī)模的日益擴(kuò)大，鯽（Carassius auratus）大規(guī)模養(yǎng)殖過(guò)程中細(xì)菌性病害越來(lái)越嚴(yán)重。溶菌酶（Lysozyme，lys）具有廣譜的殺菌功能，在魚(yú)類(lèi)非特異免疫中占有重要地位。本文以長(zhǎng)豐鯽和普通鯽為研究對(duì)象，克隆長(zhǎng)豐鯽c-lys和g-lys

2、 cDNA基因全長(zhǎng);檢測(cè)c-lys和g-lys基因在長(zhǎng)豐鯽和普通鯽中的組織表達(dá)情況;兩種魚(yú)分別感染遲鈍愛(ài)德華氏菌、嗜水氣單胞菌和金黃色葡萄球菌后，分析兩種基因在長(zhǎng)豐鯽和普通鯽肝臟、腎臟、脾臟和鰓中的表達(dá)變化特征，同時(shí)檢測(cè)四種組織的形態(tài)學(xué)變化，初步評(píng)價(jià)它們的免疫防御功能，為探討長(zhǎng)豐鯽抗細(xì)菌性疾病能力提供一定的理論依據(jù)。本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.長(zhǎng)豐鯽c-lys和g-lys基因克隆
　　長(zhǎng)豐鯽c-lys全長(zhǎng)698 bp，開(kāi)

3、放閱讀框（ORF）438 bp，編碼145個(gè)氨基酸。含有Glu53和Asp69兩個(gè)保守的氨基酸催化位點(diǎn)，八個(gè)保守的Cys，可形成四對(duì)二硫鍵。N端具有信號(hào)肽，是一種分泌蛋白;長(zhǎng)豐鯽g-lys全長(zhǎng)861 bp，開(kāi)放閱讀框（ORF）558 bp，編碼185個(gè)氨基酸。含有Glu（第73位）、Pro（第86位）和Asp（第97位）三個(gè)保守的催化位點(diǎn)。存在一個(gè)Cys殘基，但不形成二硫鍵，不存在N端信號(hào)肽，是一種胞內(nèi)蛋白。氨基酸序列比對(duì)和進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)

4、果表明:長(zhǎng)豐鯽c-lys和g-lys基因在鯉形目魚(yú)類(lèi)進(jìn)化過(guò)程中均較為保守。
　　2.三種細(xì)菌刺激后，長(zhǎng)豐鯽和普通鯽溶菌酶基因組織表達(dá)變化
　　c-lys和g-lys基因在長(zhǎng)豐鯽和普通鯽所檢測(cè)組織中均有表達(dá)，且均在腎臟中表達(dá)量最高。感染細(xì)菌后，肝臟、腎臟、脾臟和鰓組織中，長(zhǎng)豐鯽和普通鯽c-lys和g-lys基因表達(dá)量均呈現(xiàn)不同程度的上調(diào)，但兩種基因在兩種魚(yú)同一組織中升幅、出現(xiàn)高峰的時(shí)間等均有差異。
　　3.三種細(xì)菌感染后

5、，長(zhǎng)豐鯽和普通鯽各組織的病理變化
　　長(zhǎng)豐鯽和普通鯽發(fā)病后鱗片脫落，體表、肛門(mén)和鰭等部位伴有不同程度充血和出血現(xiàn)象，但兩種魚(yú)在體色和不同細(xì)菌感染剖檢后各組織顏色變化存在一定差異。
　　三種細(xì)菌刺激后，長(zhǎng)豐鯽和普通鯽出現(xiàn)癥狀相似:肝臟表現(xiàn)為肝細(xì)胞排列紊亂，分布不均，細(xì)胞核大小不一致，固縮，碎裂壞死，細(xì)胞腫脹，肝血竇和中央靜脈淤血，肝細(xì)胞滴狀玻璃樣變等癥狀;腎臟呈現(xiàn)出腎小球腫大，腎小管上皮細(xì)胞脫落，顆粒樣變，單核巨噬細(xì)胞增多，腎