肺癌轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型的建立及活體成像觀察.pdf

1、目的:建立了肺癌轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型，采用分子病理學(xué)方法檢測(cè)腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因表達(dá)，驗(yàn)證部分關(guān)鍵microRNA對(duì)人肺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系SPC-A-1sci侵襲和遷移能力的影響;應(yīng)用小動(dòng)物活體成像技術(shù)，以肺癌動(dòng)物模型為主要對(duì)象，建立熒光報(bào)告基因的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，活體觀察肺癌動(dòng)物模型的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移，為小動(dòng)物活體成像技術(shù)在腫瘤動(dòng)物模型中應(yīng)用提供參考依據(jù)。
　　 方法:采用小鼠尾靜脈注射方法觀察長(zhǎng)期傳代的高、低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系的轉(zhuǎn)移特性;通過Weste

2、rn blot、FICC、IHC等分子病理方法檢測(cè)已知轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移促進(jìn)基因CD44，OPN，MMP-9，EGFR在高、低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系間的差異表達(dá);采用siRNA干擾技術(shù)，篩選對(duì)人肺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系SPC-A-1sci侵襲和遷移能力有影響的microRNA。通過慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)建立肺癌熒光報(bào)告基因穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞，進(jìn)而建立相應(yīng)的肺癌動(dòng)物模型，采用小動(dòng)物活體成像技術(shù)觀察模型的成像效果，觀察指標(biāo)包括標(biāo)記率、靈敏度、光子信號(hào)面積，光子信號(hào)強(qiáng)度等。
　　

3、結(jié)果:動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明8周時(shí)高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系的肺轉(zhuǎn)移率為100％(12/12)，而低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系的肺轉(zhuǎn)移率僅為16.67％(2/12)。與低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系相比，轉(zhuǎn)移促進(jìn)基因CD44，OPN，MMP-9，EGFR在高轉(zhuǎn)移細(xì)胞中的表達(dá)均顯著上調(diào)。選擇23個(gè)差異顯著的microRNA進(jìn)行細(xì)胞水平的轉(zhuǎn)移潛能篩選，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)microRNA148a和microRNA200c能顯著降低人肺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系SPC-A-1sci的侵襲和遷移能力，而對(duì)microRN

4、A148a和microRNA200c進(jìn)行siRNA干擾則能顯著提高人肺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系SPC-A-1的侵襲和遷移能力。建立了GFP和GFP/Luc雙標(biāo)記報(bào)告基因的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，標(biāo)記了SMMC-7721，SPC-A-1，SPC-A-1sci，NCI-H460，MDA-MB-231sci等5個(gè)細(xì)胞系，標(biāo)記率達(dá)90％以上。小動(dòng)物活體成像系統(tǒng)的靈敏度，體外水平為100個(gè)GFP細(xì)胞，體內(nèi)水平為1×105個(gè)GFP細(xì)胞或100個(gè)Luc細(xì)胞。建立了小鼠皮