癌癥惡病質(zhì)動(dòng)物模型的建立及鑒定.pdf

1、目的:惡病質(zhì)是晚期腫瘤患者常見的臨床綜合征，還見于AIDS、嚴(yán)重創(chuàng)傷和敗血癥等。其中惡性腫瘤導(dǎo)致的惡病質(zhì)，會(huì)嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量和治療效果，增加患者死亡率。研究的目的是建立一種誘導(dǎo)小鼠腫瘤惡病質(zhì)肌肉萎縮的模型，為探索發(fā)現(xiàn)惡病質(zhì)的調(diào)節(jié)機(jī)制和治療方法提供一個(gè)研究基礎(chǔ)。
　　方法：將小鼠肺癌LLC細(xì)胞接種于雄性C57BL/6小鼠皮下，待小鼠出現(xiàn)皮毛無光澤、攝食飲水減少、行動(dòng)遲緩、體重降低明顯時(shí)，處死小鼠，取骨骼肌、胃、小腸組織，通過HE

2、染色比較肌纖維厚度和面積。采用實(shí)時(shí)定量 PCR方法檢測(cè)與骨骼肌萎縮密切相關(guān)基因（Myostatin，Atrogin-1，MuRF1）mRNA的表達(dá)水平，Western Blot方法檢測(cè)肌肉萎縮相關(guān)蛋白（Ubiquitin，F(xiàn)oxo3a，p-Foxo3a，p-Smad2，p300，HADC3等）的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：在接種LLC細(xì)胞的C57BL/6小鼠中，去瘤體重減輕22.4％，附睪脂肪減輕90.8％，運(yùn)動(dòng)相關(guān)肌肉：股四頭肌、脛骨

3、前肌、腓腸肌和比目魚肌分別減輕42.0％、39.3％、35.5％和22.8％，骨骼肌肌肉組織HE染色顯示骨骼肌纖維明顯萎縮，胃、小腸組織HE染色顯示平滑肌厚度和面積明顯減小，提示成功建立肺癌惡病質(zhì)小鼠模型。實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)肌肉生長(zhǎng)抑制素（Myostatin）和E3泛素連接酶 Atrogin-1和MuRF1 mRNA的水平，實(shí)驗(yàn)組相比對(duì)照組明顯升高；Western Blot檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組泛素化水平與肌肉代謝相關(guān)信號(hào)通路中重要的分

4、子Foxo3a、p-Foxo3a、p-Smad2實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組均明顯升高；同時(shí)具有乙?；富钚缘墓厕D(zhuǎn)錄因子p300的表達(dá)水平增高，而組蛋白去乙?；?（Histone deacetylases3，HDAC3）蛋白的表達(dá)水平降低。
　　結(jié)論：1.成功建立肺癌惡病質(zhì)小鼠模型。在惡病質(zhì)小鼠模型中，骨骼肌萎縮相比較平滑肌和心肌更為明顯。
　　2.在肺癌惡病質(zhì)小鼠中，泛素蛋白酶體信號(hào)途徑激活，Smad2磷酸化和Foxo去磷酸化被激活，