變應(yīng)性鼻炎對(duì)小鼠鼻竇黏膜細(xì)菌黏附及NF-κB p65和糖皮質(zhì)激素受體表達(dá)的影響.pdf

1、第一部分：小鼠變應(yīng)性鼻炎模型誘發(fā)急性細(xì)菌性鼻竇炎研究。 目的：探討變應(yīng)性鼻炎(allergicrhinitis，AR)動(dòng)物模型誘發(fā)細(xì)菌性鼻竇炎的方法和機(jī)制。材料與方法：清潔級(jí)C57BL6/J小鼠40只，隨機(jī)分為4組：A組(卵清蛋白+肺炎鏈球菌)；B組(卵清蛋白+生理鹽水)；C組(PBS+肺炎鏈球菌)；D組(PBS+生理鹽水)，每組各10只。①實(shí)驗(yàn)第0～8天，A組和B組用200μl10％卵清蛋白(ovalbumin，OVA)腹腔注

2、射，第9～16天用6％OVA鼻腔局部激發(fā)建立AR模型；C組和D組用等量PBS替代，步驟同前。②于實(shí)驗(yàn)第12天A組和C組鼻腔滴入肺炎鏈球菌ATCC49619(1.2×109CFU/ml)；B組和D組用等量生理鹽水代替。細(xì)菌滴鼻5d后處死動(dòng)物，處死前各組動(dòng)物行內(nèi)眥靜脈采血，以間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清白細(xì)胞介素-5(IL-5)水平；取鼻面骨，石蠟包埋，連續(xù)切片，行HE染色和甲苯胺藍(lán)染色，計(jì)算機(jī)輔助光學(xué)顯微鏡下觀察肥大細(xì)胞浸潤(rùn)

3、情況，計(jì)算每平方毫米鼻竇黏膜中多形核中性粒細(xì)胞(polymorphonuclearneutrophils，PMN)和嗜酸粒細(xì)胞(eosinophil，Eos)的數(shù)量。結(jié)果：A組和B組分別有9只和8只動(dòng)物AR建模成功，鼻部癥狀、黏膜水腫和黏膜下微血管擴(kuò)張明顯，C組癥狀輕微，D組無(wú)任何癥狀。A組鼻竇黏膜PMN密度為(139.29±26.51)mm2，高于B組(70.67+16.74)mm2、C組(63.04±14.73)mm2和D組(40.

4、24±14.05)mm2(P均＜0.01)；A組和B組Eos密度和IL-5水平分別為(134.63±25.49)mm2、(48.21±13.94)pg/ml和(116.21±25.17)mm2、(40.83±7.78)pg/ml，均高于C組(16.71±2.68)mm2、(23.89±8.65)pg/ml(P均＜0.05)和D組(13.39±4.95)mm2、(24.58±6.50)pg/ml(P均＜0.05)。結(jié)論：鼻-鼻竇變應(yīng)性炎癥

5、促進(jìn)了鼻竇黏膜繼發(fā)性細(xì)菌感染；單純的變應(yīng)性炎癥不會(huì)引起鼻竇感染。 第二部分：變應(yīng)性鼻炎對(duì)小鼠鼻黏膜NF-κBp65和糖皮質(zhì)激素受體表達(dá)的影響。 目的：探討變應(yīng)性鼻炎(allergicrhinitis，AR)小鼠鼻黏膜核因子KappaB(nuclearfactorKappaB，NF-κB)p65和糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoidreceptor，GR)的表達(dá)，進(jìn)一步了解NF-κBp65和GR在AR發(fā)病機(jī)制中的作

6、用。材料與方法：清潔級(jí)C57BL6/J小鼠20只，隨機(jī)分為AR組和對(duì)照組，每組10只。AR組用200μl10％卵清蛋白(ovalbumin，OVA)腹腔注射，6％OVA鼻腔局部激發(fā)建立AR模型。取鼻面骨，石蠟包埋，連續(xù)切片，行HE染色。分別運(yùn)用免疫組化SABC法和SP法染色，觀察鼻黏膜中NF-κVp65和GR的表達(dá)情況。結(jié)果：AR組動(dòng)物中有9只建模成功，鼻部AR典型癥狀明顯；對(duì)照組無(wú)明顯變化。(1)形態(tài)學(xué)改變：對(duì)照組鼻黏膜無(wú)明顯炎癥改變

7、；AR組黏膜則顯示不同程度水腫，黏膜下嗜酸粒細(xì)胞(eosinophil，Eos)、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤(rùn)。(2)黏膜NF-κBp65表達(dá)：NF-κBp65主要表達(dá)于上皮細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞的胞漿，偶見(jiàn)胞核。AR組中上皮細(xì)胞染色平均光密度值(0.40±0.12)較對(duì)照組(0.23±0.05)增強(qiáng)(P＜0.05)。(3)GR表達(dá)：兩組中均有GR表達(dá)，主要表達(dá)于鼻黏膜上皮、腺上皮及血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞核或胞質(zhì)。AR組中GR的平均光密度值(0.20±0