葛根素和清開靈注射液在清醒Beagle犬的類過敏反應檢測及其機制探討.pdf

1、隨著葛根素注射液和清開靈注射液在臨床上的廣泛應用,其不良反應的報道逐年增多,嚴重的有可能導致過敏性休克甚至死亡。二者引發(fā)的過敏反應中有相當一部分是首次給藥,且發(fā)生在給藥30min內(nèi),表現(xiàn)為明顯的類過敏反應特征。
　　類過敏的臨床反應癥狀與I型過敏反應相似,主要表現(xiàn)為惡心、嘔吐、腹痛腹瀉、蕁麻疹、血管性水腫、過敏性哮喘等,然而其發(fā)生機制與過敏反應不同,故而被稱為“類過敏反應”。與I型過敏反應比較,類過敏反應為首次接觸致敏原即可引發(fā)過

2、敏樣癥狀,不需要免疫球蛋白介導,而是直接刺激肥大細胞或嗜堿性粒細胞脫顆粒釋放過敏性介質(zhì)導致的。
　　建立類過敏反應評價模型對清開靈注射液和葛根素注射液進行類過敏反應評價對降低臨床中用藥風險具有重要的意義,本實驗室已建立的模型有麻醉Beagle犬類過敏反應檢測模型等,本研究在其基礎上進一步改善實驗方法,通過DSI清醒動物生理信號遙測系統(tǒng)建立清醒Beagle犬類過敏反應檢測模型,對清開靈注射液和葛根素注射液引起的類過敏反應進行評價;分

3、離犬外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),評價清開靈注射液和葛根素注射液對細胞因子的影響,探討類過敏反應與細胞因子的關(guān)系。
　　1.清醒Beagle犬類過敏反應檢測模型的建立
　　目的:建立清醒Beagle犬類過敏反應檢測模型,并用Tween80和Compound48/80評價該模型的可行性。方法:通過Beagle犬的植入手術(shù),將遙測系統(tǒng)的植入子植入犬的體內(nèi),手術(shù)恢

4、復后,經(jīng)靜脈推注分別給予犬Compound48/80和0．05%、0．1%、0．2%、0．5%的Tween80,采用DataquestA．R．T．4．3系統(tǒng)連續(xù)監(jiān)測給藥過程中及給藥后Beagle犬血壓和心率的變化并觀察犬的體征變化,研究血壓和心率作為該類過敏反應檢測指標的靈敏性。結(jié)果:Tween80和Compound48/80給藥后犬出現(xiàn)騷動、皮膚潮紅、鞏膜充血等類過敏反應癥狀,且血壓出現(xiàn)不同程度的下降,心率加快。結(jié)論:建立的清醒Bea

5、gle犬類過敏反應檢測模型具有良好的可行性,血壓、心率及犬的體征變化可作為該模型靈敏的檢測指標。
　　2.對清開靈注射液及葛根素注射液的致類過敏反應進行評價
　　目的:利用清醒Beagle犬類過敏反應檢測模型對清開靈注射液及葛根素注射液進行評價,研究二者在清醒犬引發(fā)的類過敏反應情況。方法:分別經(jīng)靜脈滴注以120 Ml.h-1的給藥速度給予犬不同濃度的清開靈注射液和葛根素注射液,采用Dataquest A．R．T．4．3系統(tǒng)連

6、續(xù)監(jiān)測給藥過程中及給藥后Beagle犬血壓和心率的變化并觀察犬的體征變化。結(jié)果:1．2 Ml．Kg-1,2．3 Ml-kg-1,11．5 Ml·kg-1清開靈注射液對犬血壓和心率均未產(chǎn)生明顯的影響,Beagle犬也未出現(xiàn)明顯的體征變化;0．24 Ml．Kg-1葛根素注射液對犬血壓和心率的影響不明顯,而0．47 Ml.kg-1葛根素注射液引起犬血壓明顯降低,平均動脈壓在藥后30 min時從藥前的(115．354±7．73)mmHg降低到(

7、91．74±10．18)mmHg(n=4,P<0．01),收縮壓從藥前的(147．33±14．65)mmHg降低到(112．884-6．51)mmHg(n=4,P<0．01),但未見明顯的體征變化,心率變化也不明顯。結(jié)論:120 Ml．H-1的給藥速度下清開靈注射液未引起清醒Beagle犬發(fā)生類過敏癥狀;葛根素注射液可使清醒犬的血壓降低,并與劑量相關(guān)。
　　3.利用犬PBMC評價清開靈注射液和葛根素注射液對細胞因子的影響及類過敏反

8、應與細胞因子的關(guān)系
　　目的:初步探究清開靈注射液和葛根素注射液對Beagle犬細胞因子的影響,研究類過敏反應與細胞因子之間的關(guān)系。方法:通過梯度密度離心法分離犬PBMC,分別與類過敏陽性藥Compound48/80及Tween80、清開靈注射液、葛根素注射液充分進行反應后利用相應的犬細胞因子ELISA試劑盒測定PBMC釋放的細胞因子水平,主要測定的細胞因子為IFN-Γtnf-α、IL-6。結(jié)果:Compound48/80與Twe

9、en80使PBMC分泌的TNF-α水平下降,清開靈注射液組和葛根素注射液組的。INF-α水平也出現(xiàn)了明顯的下降,且具有統(tǒng)計學意義上的顯著性差異。PBMC與各組藥物反應后分泌的IFN-γ水平有不同程度的下降,其中清開靈注射液引起的下降最為明顯。對IL-6的濃度進行檢測,檢測結(jié)果顯示各組的吸光度值均小于標準對照組的最小值,因此所測結(jié)果無意義。結(jié)論:Compound48/80,Tween80以及清開靈注射液和葛根素注射液可引起犬細胞因子IFN